什么情况下需要更换液相色谱柱？有什么现象？液相色谱保护柱的使用寿命是多少啊？
（1）如果更换色谱柱涉及到不同分离模式（正相、反相、离子对、离子交换等）之间的转换，要注意不同色谱柱类型之间的流动相体系的相溶性。具体见本书其它相关内容。 （2）换柱前，先确认仪器上现有的色谱柱已经冲洗干净，且柱内流动相适合保存色
此法适用于成都摩尔科学仪器有限公司GP-C18、HP-C18、BR-C18、Bio-C18和GP-C8或者其他公司品牌的类似色谱柱。
一、 新柱活化
由于色谱柱由生产厂家实验室测试完毕密封好后到达您的手中可能经过了一段时间，因此必须对您刚拿到手的柱子进行活化处理：首先，配好65%乙腈/水或者纯甲醇溶剂备用，所有进入HPLC仪器的溶剂必须经过0.2um或者0.45um过滤膜过滤并脱气；再按柱子的正确方向连接柱子进口端(连接时注意一定要把管路的端口抵紧柱子的进口以免产生死空间发生漩涡效应降低柱效), 出口端先不接检测器。先以0.1~-0.2ml/min的流速冲洗，等看到有液体从柱子中流出后，持续10mins之后再接上检测器，以循序渐进方式将流速调至1.0ml/min(LC/MS柱子应以0.2ml/min的流速进行),继续活化2小时。
二、 柱子使用
1、 首先要确认您所要分析的样品流动相的pH范围是否在您的柱子的pH范围之内，以免损坏柱子硅胶！
2、 接下来就是用你做样品的流动相去平衡柱子，如果您的流动相中含有缓冲盐溶液，在平衡柱子之前务必要先用5％的甲醇(乙腈)/水去过渡10倍柱体积(150x4.6mm柱子约为30ml，250x4.6mm柱子约为45ml；下同)以上，再用带盐的流动相去平衡柱子足够的时间(直到基线非常平稳为止)，之后方可进样分析。
3、 无论您分析何种样品，都会由于各种原因样品中总有部分杂质，因此建议您在进样前在柱子前端加接保护柱以保护您那昂贵的分析柱，或者用0.2um或 0.45um针头过滤器过滤样品后方进样分析！
三、 柱子清洗
分两种情况进行：
1、 如果您的样品分析只用到一般的甲醇，乙腈和水的流动相(包括流动相里面加了点酸)，在做完样品后可直接用65％的乙腈/水或者纯甲醇进行清洗10倍柱体积即可保存(如果时间有限，可视情况在仪器能承受的范围内加快流速******为2ml/min)；
2、 如果您的样品分析用到了含缓冲盐或者酸或者离子对试剂的流动相，在做完样品后的清洗必须按照下列2个步骤进行清洗柱子(不论您的柱子是否可以耐纯水的极性柱子还是一般的通用性柱子)：
a、***重要的步骤——用5％的乙腈(甲醇)/水，清洗20倍柱体积溶剂以上，1~2ml/min(根据时间自由调节流速：如果因为时间来不及而清洗不了那么长时间，可以适当加大流速，比如1.5 or 2ml/min；LC/MS柱子应以0.2~0.5ml/min的流速进行)，
b、65~90%的乙腈（甲醇）/水或者纯甲醇/乙腈，清洗5~10倍柱体积，1~2ml/min。
四、柱子的再生
色谱柱属于色谱分析的常用消耗品，它是有寿命的；但它寿命的长短与我们的样品处理程度、有无加保护柱以及清洗是否恰当和彻底紧密相关！！！当柱子在使用一段时间以后，它的柱压可能升高，柱效可能降低，这时如果我们对柱子进行再生，它的寿命也许会得到一定的延长。首先把柱子的方向颠倒过来（只限于成都摩尔科学仪器有限公司的色谱柱，其他公司的柱子不保证），
一、然后具体按如下方法进行：
1、5％的乙腈/水清洗20倍柱体积，1ml/min(刚开始以0.1ml/min运行，慢慢上升；下同)；
2，四氢呋喃(THF，色谱级)过柱30mins，1ml/min；
3，65~90％的乙腈（甲醇）/水 或者纯甲醇(乙腈)，清洗10倍柱体积，1ml/min。
二、蛋白污染再生：0. 1%的三氟乙酸水溶液:异丙醇（4 : 1,v/v）→乙腈： 异丙醇（1 : 2,v/v, 内含0. 1% 三氟乙酸）→水：异丙醇( 1 : 4, V/V) ，分别冲洗10～20倍柱体积。（注意每项过渡时，压力的控制，压力******控制在1500 psi以下，根据柱子的具体情况请自己优化流速）。
色谱柱预防性保护与柱寿命的延长
通常，一根色谱柱在分析数千个样品之后性能仍然保持良好，但也有的柱仅分析不多的样品后几乎就报废了。影响柱寿命和其它问题的因素很多，而有些因素是操作者很难控制的，如果被分析的样品（如分析生物样品），怎么净化样品也是“脏”的，好于色谱柱的影响是非常大的。然而采取下列措施后，在多数情况下总能够人为地减少柱上故障，达到延长柱寿命的目的。
1．加流路过滤器和保护柱
流路过滤器紧靠进样阀后面，位于分析柱前。0.5μm烧结不锈钢片夹在死体积很小的套子中，挡住来源于样品和进样阀垫圈的微粒入柱。因为每个样品都过滤既费事又带来误差，样品量少过滤更困难，因此流路上装过滤器是比较省事的办法。也可以在流路加上保护柱，放在流路过滤器和分析柱之间，或者代替流路过滤器。保护柱的使命是收集阻塞柱进口的来自样品的化学“垃圾”。这程垃圾最终隐藏低柱效能。保护柱应该是小体积，用分析柱的同种填料填装。保护柱使用得当，对分离无影响，好像未装保护柱一样。有些厂商的商品将保护柱都是用短柱、不超过3cm长，内径2～3mm，用较大粒度的填粒（15～20μm）干法填装，会使分析柱的效能有所降低。
2．避免高压冲击
一般色谱柱都能经得起高压，但经不起突然变化的高压冲击。引起高压突然冲击，主要是因样品阀的缓慢转动、泵起动快，柱切换操作等。等面已讨论过，转动六通进样阀时从泵到柱的液流会瞬时切断。在阀的泵侧压力升高，在阀的柱侧压力降低（变化超过20%）。阀转到底后压力突然冲击一下恢复正常，手动进样阀的变化不大，自动进样阀比较慢，可能造成压力冲击，可用氦气代替空气驱动进样阀。因氨压缩系数小。另外泵起动不应过快，可分步操作。如用3ml/min流速，先从1mL/min到2mL/min，然后再3ml/min，每个间隔应大于20s。
柱切换技术的应用也很广泛，切换过程中在色谱柱的入口处压力在零到很大数字之间变化，会很快使柱报废。
3．分离条件
多数色谱柱有很宽的试验条件范围，但具体应用又受到限制，主要是pH值、柱温和流动相的选择。
硅胶为基质的键合相要求pH在2.5～7之间，极端pH的流动相能“溶解”硅胶，使键合相流失。结果非碱性组分峰变宽。如果一定要用高或低pH的流动相，可加预柱（饱和柱）。预柱装在泵和进样阀之间，用分析柱相同的填料填装，或者用普通硅胶。硅胶饱和了流动相。减少了分析柱填料的损失。预柱不要求柱效高，用价格低的一般硅胶疏松地填装，按期检查硅胶的溶解情况。用预柱也有不利的影响。即新流动相难以平衡，保留时间不稳定或稳定慢。使用了预柱一定要加流路过滤器，以防止硅胶微粒引起的麻烦。
以硅胶为基质的柱和阴离子交换柱超过60℃后，会增加对流动相中化学物质的吸附。在高温下用小颗粒柱引起柱床塌陷，降低柱效，改变峰形。在4℃以上使用3μm柱，70℃以上使用5μm柱，会使N值降低50%。
有些流动相中的溶剂不能用于某些柱，如小颗粒的聚苯乙烯填料不能用于非水的排阻色谱。另一方面，有些柱与某些溶剂（如四氢呋喃）一旦达到平衡，不要随意改用其它溶剂。有关这些特殊填料，可以参见有关资料。
水溶性流动相会引起微生物生长而造成阻塞柱。色谱柱应存放在纯有机溶剂或加了50%有机溶剂的水中。凝胶柱可存放在水溶性缓冲液中，同时加0.01%叠氮钠以防止微生物的生长。
4．净化样品
用溶剂溶解的样品，多数组分在一定的时间内能完全从柱中流出来，不会造成危害。
有些样品可能含有微粒物质，样品中的某种组分（如蛋白质）在柱头上沉积下来，组分在固定相上保留很强，溶剂带走柱填料，等等，这些都会造成柱效能下降或柱寿命的影响，有必要采取措施防止柱变坏。
如在光线照射下观察样品是浑浊的或带有乳白色，进样前必须要过滤。虽然流路上装有过滤器和保护柱，但不能代替样品的前处理，样品中过多的微粒会使过滤器和保护柱超载，很快阻塞，或者微粒进入分析柱，所以在进样前必须过滤样品。
若怀疑样品与流动相混合有沉淀而对色谱柱有阻塞，应先试验一下，看样品溶液加入流动相中有无变浑或乳白色出现。如果进样后压力突然增加而后又慢慢减小，表明样品中有微粒或发生沉淀。如有沉淀要设法改变分离条件，包括换样品溶剂和流动相；或处理样品去掉不溶物质。应尽量用小体积的样品。
有些样品能很强地吸附在柱填料上，这样会降低塔板数，改变样品的保留时间、峰形，并且使得基线变差。除了用预处理的方法除去强保留物质外，还要加保护柱，定期清洗色谱柱。有时因为疏忽，用对柱有害的溶剂溶解样品，比如用6mol/L的氢氧化钠溶解样品，这样的样品只要进50～100μL到硅胶基质柱中，硅胶就很快溶解而使柱报废。在这种情况下，应立即中和样品，或除去原溶剂中的有害成分。
5．用强溶剂定期冲洗柱
每次工作结束，用强溶剂冲洗柱是良好的习惯。可用甲醇、乙腈冲反相柱，冲去留在柱上的强吸附组分。用甲醇/水为流动相时也应冲洗。冲洗的程序在以下章节中介绍。
柱头的烧结不锈钢滤片，要求平整，死体积小，孔径适当（2～5μm）。过滤片选择不好会改变色谱峰形，增加阻力或起不到阻挡污染物的作用（填料很快变色）。
此外，对柱硬件的保养也不可忽视。实际操作中应注意以下几点：
1、 接头要配套，用同一厂商的组接件；
2 、接头之间、柱压帽螺母与密封卡磁之间无微粒（填料），否则收紧时容易咬死；
3 、密封卡套与柱管一次性卡紧后再也不能松动，所以拆开柱头再上紧时要小心，不能使卡套移动，原来柱端的不锈钢滤片和垫片的厚度和强度也不能改变（改变这些附件的性能就促使卡套移动）；
4 、接头等组接件不要拧得过紧，适当上紧后接上泵试验，分步拧紧，直到不漏为止。还有非常重要的是柱硬件的损坏往往会造成不可挽回的损失。
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柱子的寿命和柱子质量有关,感觉峰形不好了,保留弱了,和以前的数据重复性差了,都是柱子变差的表现.最好过一定时间就用评价报告的条件评价一下柱子,柱效降低到80%以下,可根据经济情况考虑换新柱子.
这个是根据介质来决定的。我是做液相分析仪的，有机会可以交流。有需要可以发我的qq邮箱里面。我来帮你解决液相的实用问题 。[email protected]
13581763615：什么情况下需要更换液相色谱柱
徐玲震
：答：（1）如果更换色谱柱涉及到不同分离模式（正相、反相、离子对、离子交换等）之间的转换，要注意不同色谱柱类型之间的流动相体系的相溶性。具体见本书其它相关内容。 （2）换柱前，先确认仪器上现有的色谱柱已经冲洗干净，且柱内流动相适合保存色 ...
13581763615：HPLC检测不同的化合物需要更换色谱柱吗?
徐玲震
：答：因此，如果样品的极性差异比较大，是需要更换色谱柱的。
13581763615：液相色谱柱应该如何使用和维护?
徐玲震
：答：通常情况下,在使用硅胶、氧化铝、极性键合相色谱柱时,每次用完后可先用二氯甲烷或正己烷等溶剂低流速长时间的冲洗;键合反相硅胶色谱柱、离子交换色谱柱和凝胶色谱柱可先用高比例的水(甲醇水混合溶剂)冲洗,再用100%甲醇冲洗。此外,色谱柱低流速的反相冲洗能够有效除去堵塞在柱头或筛板上的杂质,以及清洗聚集在柱头部位的...
13581763615：色谱柱的注意事项
徐玲震
：答：液相色谱柱使用过程中，如果压力升高，一种可能是烧结滤片被堵塞，这时应更换滤片或将其取出进行清洗；另一种可能是大分子进入柱内，使柱头被污染；如果柱效降低或色谱峰变形，则可能柱头出现塌陷，死体积增大。液相色谱柱寿命在正确使用时可达2年以上。以硅胶为基质的填料，只能在pH2~9范围内使用。柱子...
13581763615：色谱柱有什么作用呢?
徐玲震
：答：气相色谱柱，气相色谱柱的长度通常在1至100米之间。气相色谱法，液相固定相结合或吸附到毛细管柱的表面上，或结合到柱内填充的固体载体上。匹配分析物和固定相的极性两者具有相似的极性，固定相的厚度在0.1到8 µm之间，而厚度越厚，分析物的挥发性就越大。高效液相色谱是液相色谱的一种。在液...
13581763615：色谱柱是什么
徐玲震
：答：色谱柱是高效液相色谱仪最主要的部件，被测物质能否被很好的分离和测定，色谱柱的性能起着决定性的作用。因此，在日常工作中，应特别注意色谱柱的正确使用和维修保养，以延长色谱柱的使用寿命。
13581763615：液相色谱柱怎么换
徐玲震
：答：先用95%乙腈+5%水冲洗旧柱子（冲去柱子中残留的缓冲盐和之前难以洗脱的组分），关掉流速，待流速降至0后，把柱子两边的PEAK头拧下来，用配套的塞子将换下的柱子两头堵上，密封保存更换新的色谱柱时，应先将需换上的柱子两边的塞子旋开。确定好柱子标示的方向后，先接柱子入口端，并使柱子出口端略...
13581763615：液相气相色谱的操作步骤
徐玲震
：答：二、严禁使用有污染的水等冲洗色谱柱，避免将互不相溶的溶剂一同进入泵内；三、流动相需经过滤、除气后方可使用；四、待分析的样品必须彻底溶解澄清、过滤，以避免堵塞、损坏色谱柱；五、分析完成后，须注意及时清洗色谱柱和检测器的比色池。以具体仪器的举例：岛津LC-10AD型高效液相色谱仪操作规程 1...
13581763615：液相色谱出现驼峰怎么办
徐玲震
：答：一种情况：同一个峰的尖部变为双尖，这种情况是色谱柱的问题，更换色谱柱。另一种情况：2个峰分不开，这种情况有以下选择：1、改为梯度洗脱 2、更改流动相 3、更换色谱柱 4、调节流动相PH值 5、调节柱温箱温度
13581763615：请问色谱柱在什么情况下需要老化柱子
徐玲震
：答：色谱柱老化主要是针对气相色谱柱的而言的，一般来说气相色谱柱比较脏时进行老化，目的是出去色谱柱中存在的脏东西，色谱柱老化时的温度一定不要超过色谱柱的耐受温度（气相色谱柱上都标着耐受的最高温度是多少）。
