纯化的蛋白析出怎么办
蛋白质变性后有沉淀产生?
：答：可逆沉淀是分离纯化蛋白质的基本方法，如等电点沉淀法、盐析法(saltingout)等,在低温下使用有机溶剂(如乙醇或丙酮)短时间作用于蛋白质也可以使蛋白质发生可逆沉淀。中性盐(硫酸铵、硫酸钠、氯化钠等)的浓溶液使蛋白质沉淀析出的作用称为盐析，其原理是高浓度的盐能破坏水化层并中和电荷,从而使蛋白质...
纯化后的蛋白做sds-page的时候,怎么处理
：答：纯化后的蛋白做sds-page的时候也是一样的处理，加入合适的Loading buffer，通过加热的方法提高SDS和蛋白质的结合效率。通过加入不含有2-ME的Loading buffer检测SDS-PAGE，初步判断是否有聚集形成聚体的结构。
蛋白质分离方法有哪些,它们的特点各是什么
：答：(-25℃),可以使冰核蛋白析出,从而纯化冰核蛋白[14].由于在室温下,有机溶剂不仅能引起蛋白质的沉淀,而且伴随着变性.因此,通常要将有机溶剂冷却,然后在不断搅拌下加入有机溶剂防止局部浓度过高,蛋白质变性问题就可以很大程度上得到解决.对于一些和脂质结合比较牢固或分子中极性侧链较多、不溶于水的蛋白质,可以用...
蛋白质分离纯化为什么尽量减少泡沫
：答：蛋白质分离纯化降低泡沫的原因：泡沫太多会引起蛋白质分离的不稳定，也会减少蛋白质分离的纯度，举个例子，同等的蛋白质分离原料，泡沫多的分离60%，泡沫少的分离80%，区别就在这里。降低泡沫的三种方法，水位降低，进气调节，出水调节。
原核表达常见问题(三)蛋白纯化后续的问题分析
：答：样品缓冲液有相同的 pH 和离子强度。离子交换纯化是利用离子交换剂上的可解离基团(活性基团)对各种离子的亲和力不一样达到分离目的的一种蛋白纯化分离技术,离子强度越大，洗脱越好。具体的离子浓度范围可以很大，0.01mol/l 到 1mol/l，甚至 3.0mol/l，PH值的范围液很广。主要根据你的蛋白质的等电...
经HisTrap HP纯化后的蛋白液,如何去除咪唑
：答：经HisTrap HP纯化后的蛋白液要去除咪唑一般是有两种方法 第一就是通过脱盐，将纯化好的蛋白通过脱盐去除咪唑 第二就是通过透析，将纯化好的蛋白通过透析去除咪唑
蛋白质分离方法有哪些,它们的特点各是什么
：答：(-25℃),可以使冰核蛋白析出,从而纯化冰核蛋白[14].由于在室温下,有机溶剂不仅能引起蛋白质的沉淀,而且伴随着变性.因此,通常要将有机溶剂冷却,然后在不断搅拌下加入有机溶剂防止局部浓度过高,蛋白质变性问题就可以很大程度上得到解决.对于一些和脂质结合比较牢固或分子中极性侧链较多、不溶于水的蛋白质,可以用...
丝素蛋白纯化后得到丝状沉淀是好还是不好
：答：不好的出现沉淀。再生丝素蛋白时出现絮状沉淀的原因是因为不好的。根据查询相关公开信息显示，当透析后离子出去了，水进来了，丝素蛋白在水溶液中的溶解度不是好的就有絮状沉淀了。形成凝胶或沉淀析出，纯化的丝素蛋白溶液通常室温下保存不宜超过两周。
蛋白纯化问题
：答：可能是表达的问题。在表达你目的蛋白的同时有很多杂蛋白被同时表达了。你可以增加前面洗脱的步骤，尽可能多的将杂蛋白洗脱掉。
蛋白质的抽提的一般原理和方法是什么??不是蛋白质的提取。。
：答：蛋白质的抽提和纯化分离一般是分开的。蛋白质抽提的原理是从适当处理后含有蛋白质的生物组织液中加入酸碱或者金属盐使得蛋白质变性析出。方法一般是匀浆，加入适当的缓冲液和金属盐溶液等等。纯化蛋白质可以使用电泳的方法。
熊食沫: ：[答案] 在提纯时整个过程是在缓冲液中进行的吗?纯化蛋白时选择合适的缓冲体系,包括盐浓度、pH值,不宜突然变换洗脱条件,注意控制好洗脱温度等
姜马受18231235763： 在进行凝血酶纯化时蛋白总是析出来,不知如何解决,过程如下:猪血将 - 硫酸钡吸附 - 洗脱 - 脱盐 - 盐析 - 激活 - 脱
熊食沫: ： 在提纯时整个过程是在缓冲液中进行的吗?纯化蛋白时选择合适的缓冲体系,包括盐浓度、pH值,不宜突然变换洗脱条件,注意控制好洗脱温度等
姜马受18231235763： 血清中蛋白析出怎么办 -
熊食沫: ： 应该是正常的呢. 因为血清的基本成分有 血清蛋白啊!!! 如果还有疑问,应该去请教医生了!!! 血清的基本成分是: [血清蛋白] 总蛋白、白蛋白、球蛋白、TTT、ZTT. [有机盐] 肌氨酸酐、尿素氮、尿酸、肌氨酸酐·净化值. [糖质] 血糖、Glycohemoglopin. [脂质] 胆固醇、三甘油脂、β-脂蛋白、HDL胆固醇. [血清酵素] GOT、GPT、γ-GTP、LDH(乳酸脱水酵素)、淀粉酶、碱性碳酸酶、酸性碳酸酶、胆素脂酶、醛缩酶. [色素] 胆红素、ICG、BSP. [电解质] 钠(Na)、钾(K)、钙(Ca)、氯(Cl). [激素] 甲状腺荷尔蒙、甲状腺刺激荷尔蒙.
姜马受18231235763： 纯化蛋白形成包涵体,怎么办 -
熊食沫: ： 取决于所需蛋白的用途,如果是测活性的话 那就得更换载体或者菌株 甚至诱导条件 使包涵体的量尽可能少;或者变性纯化 然后复性 但是此方法复性的蛋白活性会丢失很大 基本上活性丢失 也不排除还有活性的可能;如果是用来做抗体或者其他的不需要活性实验 直接变性纯化就行.
姜马受18231235763： 原核表达产物纯化后有一条非目的蛋白条带,怎么办 -
熊食沫: ： 1. 如果有来抗体,做个western blot判断下,是杂带还是降解片段; 2. 如果是杂带,优先考虑优化你使用源的纯化方案,如Ni柱,考虑延长washing buffer的时间知和提高咪唑浓度,使用分辨率更好的填料; 3. 还去不掉,考虑用2步或3步纯化,比如用离子道交换、凝胶过滤. 个人见解,仅供参考,祝一切愉快!
姜马受18231235763： 已完成纯化的蛋白如何保存 -
熊食沫: ： 保存方法如下: 1.以沉淀形式保存在高浓度的硫酸铵中. 2.添加50%甘油冷冻,尤其适用于酶类. 3.如果样品要用于生物学检测,避免使用防腐剂.在体内实验中不能添加防腐剂,而应当将样品分装成小份冷冻. 4.可使用无菌滤器以延长保存时间. 5.添加稳定剂,如甘油(5-20%)、血清白蛋白(10mg/ml)、配基(浓度取决于活性蛋白的浓度)以帮助维持生物活性. 6.避免反复冻融或冻干重溶解过程,这样很可能会降低生物活性. 7.一些冷沉淀蛋白会在4度沉淀出来,包括一些小鼠IgG3亚族的抗体,不能保存在4度冰箱中,可添加防腐剂保存在室温中.
姜马受18231235763： 如何对分离纯化后的蛋白质进行种类及量的分离 -
熊食沫: ： 1、沉淀,2、电泳:蛋白质在高于或低于其等电点的溶液中是带电的,在电场中能向电场的正极或负极移动.根据支撑物不同,有薄膜电泳、凝胶电泳等.3、透析:利用透析袋把大分子蛋白质与小分子化合物分开的方法.4、层析:利用蛋白质...
姜马受18231235763： 通过盐析析出的蛋白质还能溶于水吗? 还是难溶? -
熊食沫: ： 盐析:少量的盐(如硫酸铵、硫酸钠等)能促进蛋白质的溶解,但如向蛋白质溶液中加入浓的盐溶液,可使蛋白质的溶解度降低而从溶液中析出.这种作用叫做盐析.这样析出的蛋白质在继续加水时,仍能溶解,并不影响原来蛋白质的性质.采用多次盐析,可以分离和提纯蛋白质.
姜马受18231235763： 生物样品中蛋白质的处理方法有哪些? -
熊食沫: ： ① 盐析法 一般来说,所有固体溶质都可以在溶液中加入中性盐而沉淀析出,这一过程叫盐析.在生化制备中,许多物质都可以用盐析法进行沉淀分离,如蛋白质、多肽、多糖、核酸等,其中以蛋白质沉淀最为常见,特别是在粗提阶段. 盐析法...
姜马受18231235763： 求解:蛋白纯化中结晶的常用哪几种方法?他们的使用优势和劣势? -
熊食沫: ： 分离提纯某一种蛋白质时,首先要把蛋白质从组织或细胞中释放出来并保持原来的天然状态,不丧失活性.所以要采用适当的方法将组织和细胞破碎.常用的破碎组织细胞的方法有: 1. 机械破碎法 这种方法是利用机械力的剪切作用,使细胞破...
相关链接： 蛋白纯化完后透析 | akta蛋白纯化仪进了空气 | 蛋白纯化的技术有哪些 | akta蛋白纯化系统 | 蛋白纯化仪购买 | 蛋白质亲水还是疏水 | 蛋白纯化为什么要透析 | 蛋白表达纯化实验步骤 | 纯化的蛋白一直有两条带 | 为什么蛋白纯化岗位难招人 | 纯化技术员主要干什么 | 蛋白纯化后会有絮状物 | 蛋白纯化为什么会有杂蛋白 | 蛋白质分离纯化实验步骤 | 蛋白纯化工艺流程 | 纯化出来的蛋白有杂带 | 蛋白纯化杂带特别多 | 蛋白透析有沉淀还能用吗 | 蛋白纯化原理及方法 | 蛋白浓缩后杂带变多 | his蛋白纯化时咪唑的浓度 | 镍柱纯化如何减少杂带 | 纯化蛋白时有杂带为什么 | 蛋白纯化有杂带咋办 | 蛋白纯化工作人员累吗 | 蛋白纯化方法及原理 |
