连t载体
T载体连接问题
：答：1、T载体连接有问题，重新调整目的片段和T载体的比例，重新连接。2、PCR某种试剂出问题了，以前有个师姐就是这样，怎么也扩不出来，让别人带样扩出来了，原来是Taq 酶出问题了，你也可以确定一下。
T载体是质粒载体吗
：答：PCR产物一般和 T载体相连，T载体是一种线性载体，和你的目的片段连接以后，就变成了 圆形的质粒。 T载体的种类很多，takara的书上有很多介绍。
为什么pcr产物可以直接连t载体
：答：普通的taq聚合酶会在PCR反应过程中在3’末端加入一个碱基A，线性化平末端T载体的两端分别又人工加上一个额外的T碱基，从而可与PCR克隆产物的A末端互补配对，提高了PCR产物连接和克隆的效率。
t载体连接原理
：答：T载体连接原理是基于DNA连接酶的作用，将目的DNA片段与T载体进行连接，形成重组DNA分子的过程。详细来说，T载体是一种特殊设计的线性DNA分子，其末端带有一个突出的单链T（胸腺嘧啶）碱基。这个突出的T碱基可以与目的DNA片段末端的A（腺嘌呤）碱基进行互补配对，形成TA配对。这种TA配对是基于DNA碱基互补...
为什么pcr产物要先连在t载体上
：答：T载体是一种克隆载体，链接后先得到较多的拷贝，可以提高链接表达载体的效率。
...假如我有有一个基因片段,未知序列。我可以把它连接到T载体...
：答：T载体分两种。一种是末端带有A的典型的T载体，这样的T载体可以与taq酶扩增出来的片段连接，另一种是平末端的T载体，这种T载体末端没有A，它用于以pfu或者是phusion这样的高/超保真酶扩增出来的片段的连接，因为你的序列是未知的，为保万无一失，建议你最好先用taq给它处理下，即末端加A然后再和...
pcr产物胶回收浓度低,能不能和T载体连接
：答：可以，不过浓度太低的话会导致载体自连的比例增加，挑去单克隆后提取的质粒可能是空载的概率增加
T载体连接步骤是怎么样的?都要注意些什么呢?
：答：PCR产物纯化后测定DNA的浓度，按照适当的比例与T-Vector在含有连接酶的buffer中4°过夜或37°3小时连接，然后连接产物涂筛选平板（ALB)筛选即可。要确保产物末端有A尾，如果是高保真酶扩增的产物需先加A尾，纯化后再连接；再就是载体和产物的比例要合适。
含粘性末端的目的片段能与T载体相连吗
：答：T克隆的原理是基于常规PCR反应中所使用Taq聚合酶能够在PCR产物的3‘末端非特异性添加一个A,这样实际上常规PCR产物都含有3端突出一个A的粘性末端.基于这个原理,常规的线性T－克隆载体（PUC18和PUC19等）在其3’末端添加一个T,这样的载体能够和任何PCR产物进行连接克隆,并不需要添加任何特异性的粘性末端...
3K的PCR片段连T载体,怎么连才好连
：答：第一，先确定聚合酶能不能末端加A，如果不想，用cDNA做模板pcr，末端加上A。第二，合适的比例，你这个建议mol比1：1连接。连之前先在65度的水里浴下，混匀后加连接酶。
徐荷枝: ： T载体是TA克隆载体的简称,就是利用载体的T末端和PCR产物的A末段连接而将目的基因克隆到载体中的方法. 生物帮上面有相关的详细介绍, http://doc.bio1000.com/list-134.html RNA电泳技术文档,RNA电泳技术文档下载 . 生物帮bio1000是生物行业门户网站,信息内容丰富、科学、专业,内容主要包括生命科学领域产品、技术文档、视频、生物问答、在线交流核心版块,每一个版块中有细分的栏目和内容.
国霍洪15351179850： T载体的作用是什么?克隆时为什么要用T载体? -
徐荷枝: ： 我做过几个克隆,没用过T载体,直接将酶切后纯化的产物进行连接,照样可以连接成功,基本上都会有10-50个克隆长出来.我用的是Sal I和Nde I这两个酶切位点,似乎这两个都是平端的哦.
国霍洪15351179850： T载体是什么? -
徐荷枝: ： 一段线性双链DNA载体,载体的两端3'末端各有一个额外的T.因为大部分Taq聚合酶会在PCR产物3'末端添加一个额外的A,所以使用T载体可以比较方便且高效(相对于平末端)进行PCR产物的连接反应,以方便克隆的构建或检测.
国霍洪15351179850： T载体指什么? -
徐荷枝: ： 应该是分子克隆用的载体,使用前是双链线性片段,上面有必要的测序或表达元件,两头是黏末端,各在3'有一个游离的T(故名T载体).因为PCR实验中用的聚合酶大部分都是taq和taq的同类酶,会在PCR产物的3'末端自动加一个A,这样PCR产物纯化之后无需酶切就可以与T载体连接,连接结果为带有目的片段的环状质粒载体.之后转化挑克隆,进行表达和测序.
国霍洪15351179850： ta克隆的优缺点 -
徐荷枝: ： 一、缺点: 1、PCR产物的酶切和判断比较困难. 2、另外酶切连接过程本身也相当地费时费力. 二、优点: 1、克隆PCR产物较简便、快捷的方法. 2、不需使用含限制酶序列的引物,不需将 PCR 产物进行优化,不需把PCR产物做平端处理...
国霍洪15351179850： 基因连入T载体后再连入载体2301,步骤是什么?
徐荷枝: ： 你的目的基因两端加了酶切位点么?或者目的基因转录序列的外侧有没有酶切位点?有的话双酶切再连接.没有的话建议你设计带酶切位点的接头,然后再连到T载体上去. 这样.你先把含T载体的菌摇起来,提质粒,双酶切,割胶回收酶切片段(小的那一段,就是你要的基因).2301载体你看看有没有那两个酶切位点,同尾酶也可以,双酶切,回收切开的载体.然后把载体和基因片段连接,转化感受态细菌,挑平板,就行了.不要用菌液,要用提出的质粒!酶切体系你购买酶的时候会告诉你的.
国霍洪15351179850： 外源基因连接T载体导入到大肠杆菌,那么外源基因能在 -
徐荷枝: ： 可以的,因为它上面有启动子. 但是T载体一般不用做表达载体,因为它是靠T-A连接的(T载体上含多个T,PCR产物含多聚A),读码框未必正确,所以一般是用作中间过渡的载体,后续要把这段基因切下来(你的扩增引物上需要设计酶切位点,保证读码框正确),换到专门的表达载体去才行.
国霍洪15351179850： pcr产物与t载体连接体系怎么设定,模板浓度约10ng每位peg,t载体、连接酶该加多少,是怎么设定的为什么? -
徐荷枝: ：[答案] 与T载体连接很容易的,不用考虑那么复杂的因素 只要你回收的PCR产物电泳后能看到带,连接基本都能成功
国霍洪15351179850： 在生工测序连接有t载体的质粒 怎么看哪一部分是目的片段 -
徐荷枝: ： 找到载体插入位点两端的序列,中间的就是你的目的片段.T载体一般用于PCR产物的克隆,如果是PCR产物的话,你可以找到你扩增用的引物序列,引物及引物中间的序列就是你要的目的片段
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