19t载体

首页 >> 正文

19t载体

来源：www.zuowenzhai.com 投稿：2024-06-14

原核表达产物的鉴定方法
：答：2.PCR扩增片段3.扩增后的片段与pMD18/19T克隆载体连接，通过蓝白斑筛选，提质粒并酶切鉴定；将正确连接的克隆载体重组质粒酶切，回收目的片段4.目的片段与表达载体连接5.转化到DH5a等克隆菌株，通过抗生素筛选，鉴定表达重组质粒。6.测序检测7.正确的表达重组质粒再转到表达菌株8.表达 ...

PCR产物怎么做TA克隆
：答：1 平末端的PCR产物,首先需要用普通的taq酶让其末端加上A（一般跑完PCR,直接加少量普通taq,72度继续20-30min,就行了,如果你不放心,可以纯化一下,然后按PCR体系加入taq,dATP,buffer等,72度,30min）,然后和普通PCR产物一样进行TA克隆；2 具体的克隆方法,参考所用T载体的说明书.比如TAKARA的pMD-19T...

分子试验中,目的基因与载体连接需要在什么样的环境中连接?
：答：水浴锅金属浴 PCR仪都可以 16度理论上是过夜不过哥经实践证明2个小时足矣。。。

pmd19tm-t vector cloning kit 中的soulution i 可以用于其它的克隆吗...
：答：1.直接用F或R测序，看有没有插入片段；或拿载体两端的特定的限制性酶切一下质粒，看有没有片段切出来； 2.用生物学软件比如DNAMAN等得到反向互补序列，再比对，

急啊!最近做TA克隆一直无法得到结果,涂完平板后长的斑很少,而且都是假...
：答：你用PMD19T simple试试，我一直都是用这个做的，效果还挺好的，这种载体消除了LacZ基因上的多克隆酶切位点，效果更好一些。

基因片段和载体名称的英文读法
：答：我们在美国都是直接读字面的。比如“P-M-D-nineteen-T”

有人知道伟雅AV一970功放机吗?
：答：“AV”功放是近年脱缰而出的一匹黑马,随着大屏幕电视,多种图象载体的普及,人们对“坐在家里看电影”的需求日益高涨,于是集各种影音功能于一体的多功能功放应运而生。“AV”是英文Audio/Video即音频,视频的打头字母缩写。“AV功放”从诞生到现在,经历了杜比环绕,杜比定向逻辑,AC-3,DTS的进程,AV功放的与普通功放...

长寿基因的研究进展
：答：它有2，3，4三种亚型，由不同的等位基因编码，并与特异的脂蛋白受体作用改变血循环中胆固醇的水平。Christensen等发现ApoE4不仅是患心血管疾病和阿尔茨海默病的高危因素，也是患者暴露于高危环境后更易受其他疾病损坏的载体，比如脑外伤后携带它的患者更易患慢性脑损伤，外周动脉粥样硬化糖尿病衰退期的患者...

急,如何构建原核表达载体
：答：大体分为一下几步：1.设计目的片段引物（含限制性酶切位点，要求：表达载体上有而目的片段上没有的酶切位点）2.PCR扩增片段 3.扩增后的片段与pMD18/19T克隆载体连接，通过蓝白斑筛选，提质粒并酶切鉴定；将正确连接的克隆载体重组质粒酶切，回收目的片段 4.目的片段与表达载体连接 5.转化到DH5a等...

直接跑pcr和加上克隆载体的区别
：答：1 平末端的PCR产物,首先需要用普通的taq酶让其末端加上A（一般跑完PCR,直接加少量普通taq,72度继续20-30min,就行了,如果你不放心,可以纯化一下,然后按PCR体系加入taq,dATP,buffer等,72度,30min）,然后和普通PCR产物一样进行TA克隆；2 具体的克隆方法,参考所用T载体的说明书.比如TAKARA的pMD-19T...

吴郑严13885708519：    连接19T载体后,出现假阴性,要重新提取质粒的详细步骤是? -
贝滢叶:      ：首先需要确定是假阳性,你是PCR鉴定的吗? 重新提取质粒和原来提取的方法是一样的,就是重新接菌落,摇一晚上后提取,收集菌体、加溶液I、II、III再去除蛋白沉淀即可.

吴郑严13885708519：    请教基因克隆连接载体PTG - 19T的精确大小 -
贝滢叶:      ： 2880bp

吴郑严13885708519：    原核表达载体的介绍 -
贝滢叶:      ：原核表达载体,能携带插入的外源核酸序列进入原核细胞中进行表达的载体.

吴郑严13885708519：    T载体是什么?
贝滢叶:      ：一段线性双链DNA载体,载体的两端3'末端各有一个额外的T.因为大部分Taq聚合酶会在PCR产物3'末端添加一个额外的A,所以使用T载体可以比较方便且高效(相对于平末端)进行PCR产物的连接反应,以方便克隆的构建或检测.

吴郑严13885708519：    T载体指什么? -
贝滢叶:      ：应该是分子克隆用的载体,使用前是双链线性片段,上面有必要的测序或表达元件,两头是黏末端,各在3'有一个游离的T(故名T载体).因为PCR实验中用的聚合酶大部分都是taq和taq的同类酶,会在PCR产物的3'末端自动加一个A,这样PCR产物纯化之后无需酶切就可以与T载体连接,连接结果为带有目的片段的环状质粒载体.之后转化挑克隆,进行表达和测序.

吴郑严13885708519：    T载体的作用是什么?克隆时为什么要用T载体? -
贝滢叶:      ：我做过几个克隆,没用过T载体,直接将酶切后纯化的产物进行连接,照样可以连接成功,基本上都会有10-50个克隆长出来.我用的是Sal I和Nde I这两个酶切位点,似乎这两个都是平端的哦.

吴郑严13885708519：    PCR产物有清晰的目的条带,经过纯化后连接pMD - 19T载体并用DH5α进行转化,但菌检PCR产物电泳无目的条带, -
贝滢叶:      ：一般来说,出在转化和连接上.转化的话,你要做对照实验,阴性对照和空菌对照,看你转化有问题没.连接的话,连接体系一定要对.加油改进吧,望采纳^O^

吴郑严13885708519：    表达载体构建急求高手指点
贝滢叶:      ：核对一下表达框架有没有移位,如果有移位,就不行了,可以在重新找酶切位点,而且表达框架要正确,不能移位,或者在重新设计引物吧 …………………… …………………… 表达载体 http://product.bio1000.com/100019/

吴郑严13885708519：    直接跑pcr和加上克隆载体的区别 -
贝滢叶:      ：直接跑pcr和加上克隆载体的区别zd1 平末端的PCR产物,首先需要用普通的taq酶让其末端加上A(一般跑完PCR,直接加少量普通taq,72度继续20-30min,就行了,如果你不放心,可以纯化一下,然后按PCR体系加入taq,dATP,buffer等,72度,30min),然后和普通PCR产物一样进行TA克隆;2 具体的克隆方法,参考所用T载体的说明书.比如TAKARA的pMD-19T,里面有详细的介绍和注意事项.最重要的就是要注意目的片段和载体间的摩尔比要合适(一般3-8:1)

吴郑严13885708519：    常用的基因工程载体有哪些?各有什么优缺点? -
贝滢叶:      ： 1、质粒载体 pBR322 2、克隆载体 3、表达质粒载体真核细胞常见表达载体 .pCMVp-NEO-BAN载体特点: 该真核细胞表达载体分子量为6600碱基对,主要由CMVp启动子、兔β-球蛋白基因内含子、聚腺嘌呤、氨青霉素抗性基因和抗neo基因以...

（编辑：qq网友）