elisa blocking buffer 到底是5%的bsa还是0.5%bsa

封闭液的浓度，与其他条件一样都需要摸索，在不同的ELISA中是不一样的，可以做几个浓度的作对比，选取合适的浓度。
我现在用的封闭液也是BSA，一般是1%，2%，具体不同实验还是需要去摸索的。

差点没啥影响 只要每个孔都是同样浓度的来洗

Tween-20有复性抗原的作用，可提高特异性的识别能力。在做westen blot时，用惰性蛋白质或非离子去污剂封闭膜上的未结合位点可以降低抗体的非特异性结合。封闭剂应该封闭所有未结合位点而不替换膜上的靶蛋白、不结合靶蛋白的标委、也不与抗体或检测试剂有交叉反应。最常见的封闭剂是BSA、脱脂奶粉、酪蛋白、明胶和Tween-20（0.05 - 0.1%）稀溶液。

一抗的稀释看你试验的要求了。二抗你说的是酶标抗体吧，这个要稀释到工作浓度，后面的显色效果才是最佳的！
BSA主要是封闭液中用到，其实作用显而易见是起到封闭效果，就是结合包被过程中未结合的结合位点，提高ELISA中的特异性结合，提高实验的精确度。一般浓度是1%-2%

tween浓度加大可以把非特异性的蛋白洗掉，但是一般在包被液中不会加入tween，而在洗液和一二抗稀释也种加入tween。
一二抗的稀释液中可以加入BSA，降低非特异性识别。
可以在封闭时用3% BSA，抗体稀释液用1% BSA。3%应该也不会影响特异性。

tween只是起到漂洗作用，不会将包被的蛋白洗掉的。一抗和二抗的稀释液用封闭液的浓度就好。我习惯用2%的BSA，不会影响特异性识别的

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