首页 >>  正文

细胞骨架标本片制备过程中用于固定的试剂是

来源:www.zuowenzhai.com    作者:编辑   日期:2024-06-02
植物细胞骨架观察中考马斯亮蓝有什么用

考马斯亮蓝g-250(coomassie
brilliant
blue
g-250)测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。考马斯亮蓝g-250在游离状态下呈红色,最大光吸收在488nm;当它与蛋白质结合后变为青色,蛋白质-色素结合物在595nm波长下有最大光吸收。其光吸收值与蛋白质含量成正比,因此可用于蛋白质的定量测定。蛋白质与考马斯亮蓝g-250结合在2min左右的时间内达到平衡,完成反应十分迅速;其结合物在室温下1h内保持稳定。该法是1976年bradford建立,试剂配制简单,操作简便快捷,反应非常灵敏,灵敏度比lowry法还高4倍,可测定微克级蛋白质含量,测定蛋白质浓度范围为0~1
000μg/ml,是一种常用的微量蛋白质快速测定方法。
考马斯亮蓝有g250和r250两种。其中考马斯亮蓝g250由于与蛋白质的结合反应十分迅速,常用来作为蛋白质含量的测定。考马斯亮蓝r250与蛋白质反应虽然比较缓慢,但是可以被洗脱下去,所以可以用来对电泳条带染色。
考马斯亮蓝法测定蛋白质含量流程
该方法用于大多数蛋白质的定量是比较精确的,但不适用于小分子碱性多肽的定量。如核糖核酸酶或溶菌酶。去污剂的浓度超过0.2%影响测定结果。如tritonx-100、sds、np-40等。
1.bradford浓染液的配制:将100mg考马斯亮蓝g-250溶于50m1
95%乙醇,加入100ml浓磷酸,然后,用蒸馏水补充至200ml,此染液放4℃至少6个月保持稳定。
2.标准曲线蛋白质样本的准备:尽量使用与待测样本性质相近的蛋白质作为标准品,例如测定抗体,可用纯化的抗体作为标准。如果待测样本是未知的,也可用抗体作为标准蛋白。通常在20ug—150ug/100ul之间绘制标准曲线。
3.将待测样本溶于100~1缓冲溶液中,该缓冲溶液应与制作标准曲线的缓冲溶液相同(最好用pbs)。
4.按1:5用蒸馏水稀释浓染料结合溶液,如出现沉淀,过滤除去。
5.每个样本加5ml稀释的染料结合溶液,作用5~30rain。染液与蛋白质结合后,将由红色变为蓝色,在595nm波长下测定其吸光度。注意,显色反应不得超过30min.
6.根据标准曲线计算待测样本的浓度。

  在细胞骨架观察实验中,M缓冲液的作用是使细胞骨架中的微丝保持稳定的溶液。
  在M缓冲液中,其中咪唑是缓冲剂EGTA和EDTA螯合Ca离子,溶液并提供Mg离子,在低钙条件下,骨架纤维保持聚合状态并且较为舒张,便于观察
  由弱酸及其盐、弱碱及其盐组成的混合溶液,能在一定程度上抵消、减轻外加强酸或强碱对溶液酸碱度的影响,从而保持溶液的pH值相对稳定。这种溶液称为缓冲溶液。

细胞骨架标本片制备过程中用于固定的试剂是磷酸盐,磷酸盐是几乎所有食物的天然成分之一,作为重要的食品配料和功能添加剂被广泛用于食品加工中。它是磷酸的盐,在无机化学、生物化学及生物地质化学上是很重要的物质。
磷酸盐是几乎所有食物的天然成分之一,作为重要的食品配料和功能添加剂被广泛用于食品加工中。天然存在的磷酸盐是磷矿石(含磷酸钙),用硫酸跟磷矿石反应,生成能被植物吸收的磷酸二氢钙和硫酸钙,可制得磷酸盐。
磷酸盐可分为正磷酸盐和缩聚磷酸盐:在食品加工中使用的磷酸盐通常为钠盐、钙盐、钾盐以及作为营养强化剂的铁盐和锌盐,常用的食品级磷酸盐的品种有三十多种,磷酸钠盐是国内食品磷酸盐的主要消费种类,随着食品加工技术的发展,磷酸钾盐的消费量也在逐年上升。


15760323974在细胞骨架临时装片的制作过程中,曲拉通和二戊醇起什么作用?
程钧叙答:曲拉通使细胞膜和胞内的脂类物质被溶解,戊二醛对细胞进行固定且不破坏细胞骨架结构

15760323974细胞骨架观察中戊二醛的作用?
程钧叙答:为了更好地观察微丝束的结构,采用了戊二醛对细胞进行固定.戊二醛是一种双交联剂,渗透快,交联能力强,对蛋白质的固定效果好,且不破坏细胞骨架的结构.

15760323974高中生物细胞骨架知识点
程钧叙答:细胞骨架是指真核细胞中的蛋白纤维网络结构。发现较晚,主要是因为一般电镜制样采用低温(0-4℃)固定,而细胞骨架会在低温下解聚。直到20世纪60年代后,采用戊二醛常温固定,才逐渐认识到细胞骨架的客观存在。真核细胞借以维持其基本形态的重要结构,被形象地称为细胞骨架,它通常也被认为是广义上细胞器的...

15760323974细胞骨架中结构最稳定的是
程钧叙答:细胞骨架(cytoskeleton)是指真核细胞中的蛋白纤维网络结构,发现较晚,主要是因为一般电镜制样采用低温(0-4℃)固定,而细胞骨架会在低温下解聚。直到20世纪60年代后,采用戊二醛常温固定,才逐渐认识到细胞骨架的客观存在。细胞骨架不仅在维持细胞形态,承受外力、保持细胞内部结构的有序性方面起重要作用...

15760323974标本制备固定的方法有哪两个
程钧叙答:分别为物理样品标本固定和化学样品标本固定。

15760323974血细胞涂片可以选用的固定液可以有哪些
程钧叙答:Carnoy液能固定胞浆和胞核,尤其适宜于染色体等。常用于糖原及尼氏体的固定,由于冰醋酸能溶解红细胞并可防止细胞由酒精引起的过渡收缩,对固定有血的标本和显示DNA、RNA效果很好。缺点是每次固定后固定液内有大量的红细胞碎片和细胞脱落,必须及时过滤,否则容易造成污染。其次,氯仿具有挥发性和毒性,...

15760323974病理组织学常用制备技术-组织的固定
程钧叙答:一、组织的固定(一)固定的概念应用各种方法使病理标本尽量保持其离体前状态的过程称为固定。病 理标本(样本)离体后,由于微环境的变化将发生自溶和(或)腐败,使其结构破坏。固定的目的和机制是:①使蛋白质凝固,终止或减少分解酶的作用,防止自 溶,保存组织、细胞的离体前结构状态,包括保存组织...

15760323974M-缓冲液、戊二醛在细胞骨架观察实验中的作用是什么?
程钧叙答:M缓冲液使细胞骨架中的微丝保持稳定。在M缓冲液中,其中咪唑是缓冲剂EGTA 和EDTA螯合 Ca离子,溶液并提供Mg离子,在低钙条件下,骨架纤维保持聚合状态并且较为舒张,便于观察。戊二醛主要是起固定作用,且能较好地保存细胞骨架成分。

15760323974细胞骨架的特点
程钧叙答:直到20世纪60年代后,采用戊二醛常温神哗蠢固定,才逐渐认识到细胞骨架的客观存在。是真核细胞借以维持其基本形态的重要结构,被形象地称为细胞骨架,它通常也被认为是广义上细胞器的一种。广义的细胞神哗蠢骨架概念是细游陪胞核骨架、细胞质骨架、细胞膜骨架和胞外基质所形成的网络体系。细胞骨架的作用...

15760323974在制备细菌标本涂片的过程中,固定的目的是什么
程钧叙答:目的:使细胞质凝固从而使细胞形态固定并使细菌粘附在玻片上


(编辑:殳知诞)
联系方式:
关于我们 | 客户服务 | 服务条款 | 联系我们 | 免责声明 | 网站地图
@ 作文摘要网