为什么用缓冲液水化脂质体？

、脂质体离

适化结构亲脂性药物镶嵌双层膜内包裹脂质体其包封率取决于所用脂质浓度种情况包封率达90％定要除未包裹药物水溶性药物言包裹药物仅总量部必须脂质体悬液除未包裹药物由于脂质体比包裹药物要利用同离除未包裹药物些凝胶滤柱层析渗析等；若包裹物质蛋白质或DNA或者未包裹药物能形较聚结物则利用与脂质体浮力、密度同采用诸离等进行离

()柱层析

凝胶渗透层析技术广泛用于脂质体悬液离除未包裹药物用于悬液脂质体组技术实验室效且快速规模产虽用凝胶滤纯化技术较困难且价格昂贵另外脂质体洗脱介质稀释能需要增加浓缩步骤
柱层析填料用葡聚糖Sephadex G-50其步骤与规致必须指：①葡聚糖表面存着能与脂质体膜结合并相互作用微部位虽种作用并影响脂质体凝胶柱流特征仍导致少量脂质损失使膜稳定性增加导致膜渗透性改变及包裹物质渗漏种现象脂质浓度较低情况特别应予注意般通加脂质体品柱量或用空脂质体预先柱饱解决通使用20mg脂质制单层脂质体饱10g凝胶；②若凝胶颗粒太细较脂质体能滞留凝胶柱层脂质体宜选用粗级凝胶(粒径50～150μm)单层脂质体则用任何级别凝胶

(二)渗析

简单用除未包裹药物(化合物除外)需要复杂技术须昂贵仪器且能够扩产通断改换渗析介质除所游离药物费般室温条件要除95％游离药物至少需要更换三渗析介质间10～24h外渗析介质渗透强度应与脂质体悬液致否则渗析改变脂质体悬液体积且能引起包裹物质渗漏

(三)离

同离力离离除同种类脂质体游离药物效完全除游离药物需重复悬浮离使脂质体沉所需离力取决于脂质体某种程度取决于混悬液絮凝状态脂质体且布窄需要高速离及冰冻条件低速(2000～4000r／min)离能使脂质体沉降
显于量脂质体利用高速冰冻离极其耗能昂贵适于离脂质体于比较脂质体低速离缩短操作间并且同较稀脂质体悬液浓缩所需浓度避免脂质体遭破坏必须注意保证重复混悬介质渗透压与脂质体悬液渗透压相致

二、脂质体包封率测定

()百包封率测定

显考查包裹物质物体内行前必须测定该物质脂质体量采用述离除未包入脂质体游离物质利用式计算百包封率(Encapsulation percentageEN％)

EN％=(1Cf／Ct)×100％

式Cf游离药物量；Ct脂质体悬液药物总量
再介绍两种快速、用量少且适应性广离游离物质并测定EN％

1．微型柱离(minicolumn centrifugation method)

取塑料注射针筒填滤膜作衬片装入用理盐水溶胀Sephadex G-50再针筒置离管低速离(2000r／min3min)除余理盐水凝胶柱变干并能与针筒内壁离精确定量加入脂质体品注意勿滴入柱床边缘离(2000r／min3min)使脂质体进入离管待测再凝胶柱加入少量理盐水依离离液能再脂质体或仍含少量主要取决于脂质体及组游离药物程葡聚糖吸附离凝胶柱再加理盐水离使柱干游离药物洗脱进入离液反复几直至全部游离药物均柱离洗脱别测定包封药物及游离药物浓度计算EN％(图20—10)

微型柱离优点脂质体悬液几乎没稀释于实验室规模试验较用离除未包裹药物快速测定包封率

2．鱼精蛋白凝聚(protamine aggregation)

用于任何组脂质体性或带负电荷脂质体(图20－11)：

取0.1ml脂质体悬液于10ml锥形离管加入0.1ml鱼精蛋白溶液(10mg／ml)搅匀静置3min再加3ml理盐水室温条件离吸取2ml清液测定游离药物浓度剩余清液弃沉淀物0.6ml 10％ Triton X-100重新混悬使脂质体膜材溶解再补充理盐水至总体积3.2ml测定包封药物浓度便算EN％

(二)包裹容积测定

包裹容积(entrapped volume)指制脂质体相于每毫克磷脂所占内水相体积般微升(μl)表示包裹容积计算通测定包裹脂质体内药物总量推测假设脂质体内水性介质药物浓度与始制备所用药物浓度经离除未包裹药物没物质脂质体渗漏则容易计算许情况假设往往能立例用二乳化制备脂质体干燥除机溶剂内水相能失；另外由于内外渗透压差异水进入或逸脂质体测定内部容积办直接测定水量例利用具光谱性液体代替内相介质利用核磁共振(NMR)测定测水量脂质体高速离(200000g6h)沉降紧密沉淀除尽清液沉淀物D20(deuterium oxide)重新混悬由于膜于水渗透性使整体系H20D20快达平衡取少量用于磷脂量测定剩余部作水NMR扫描峰高与D20含水浓度比与标准溶液照即求水量计算脂质体包裹容积

三、脂质体稳定性

脂质体放置程能发种同变化磷脂质氧化水解短链磷脂并膜形具溶解性衍物；另外脂质体发凝聚、融合等物理变化导致包裹物质渗漏脂质体制剂若要发展产品应市必须贮藏期间具良稳定性；体内达靶组织前或发挥其缓释作用前亦须保持定及完整性已证明脂质体血液比较稳定随磷脂化性质、胆固醇比例脂质体、双层数目等同脂质体体内稳定性所同若贮存程药物脂质体迅速渗漏则必限制脂质体应用价值

()化稳定性

脂质体组磷脂氧化降解应制备即加防止采用些措施尽能降低氧化程度例使用新鲜提纯磷脂新鲜蒸馏溶剂尽量避免高温并充氮氧条件完制备程脂质体贮存于惰性环境等
膜材组加入抗氧剂种效目前用抗氧剂α-育酚种毒食用脂质据认蛋卵磷脂氧化解α-育酚加入减缓另选择降低氧化程度使用饱磷脂代替饱磷脂源磷脂其饱度随植物、蛋黄、哺乳物依增加于蛋黄磷脂饱度取决于物饲料及所用提纯
论饱饱磷脂脂质体水性悬液都能水解形溶血磷脂脂肪酸溶血磷脂进步水解形甘油磷脂脂肪酸甘油磷酸间酯键难水解所产游离磷酸甘油精制豆磷脂脂质体水性悬液水解力已研究结表明豆磷脂水解主要受H+OH+催化作用pH6.5左右水解速率体系加入缓冲离醋酸、枸橼酸缓血酸铵轻度增加豆磷脂水解

(二)物理稳定性

脂质体包裹药物渗漏凝聚、融合团块等物理稳定性问题脂质体研究工作难题些研究表明单层脂质体贮存体积增药物渗漏与脂质及包裹药物性质关由性磷脂制备脂质体凝聚主要由于范德华力相互作用所致膜材加入少量负电荷磷脂(10％PA或PG)克服膜材加入微量1,3-二乙酰-2-磷脂酰胆碱阻止较脂质体融合
较脂质体制备适条件般发融合于40nm单层脂质体由于膜曲率易于发融合特别相变温度更易发
采用前体脂质体等重建脂质体较避免脂质体贮存发化物理变化重建脂质体三种类型：含药或含药干脂质膜；含药或含药冻干脂质混合物：含药冻干脂质体于干脂质膜或冻干脂质混合物重建所获药物包封率限特别亲水性药物包封率高悬液含较游离药物实际应价值于具适结构亲脂性药物重建产品达较满意包封率重建程所需条件例搅拌程度要求高温超声处理等实际应用甚便
于亲水性药物选择含药冻干脂质体重建形式报道冰冻程若加入亲水性聚合物葡聚糖能产自由流能利于冻干脂质体水性介质重建例含胰岛素冻干脂质体用种处理其重建包封率达原70％即冰冻重建程胰岛素渗漏率约30％包裹低量药物渗漏率能更高些种技术保证脂质体制剂贮存稳定性提供效

四、脂质体测定

脂质体影响脂质体体内处置脂质体重要质量指标测定脂质体激光扫描电显微镜或库尔特粒度析疑电镜测定准确直接观察每脂质体并获各范围内脂质体外形精确信息要观察量脂质体本非费相反．激光扫描非简单且操作快速仅能测脂质体平均性质与类似采用库尔特粒度析仪测脂质体布二种均难描述更精细结构关于粒度测定细节参见本书第十二章

五、脂质体析

()磷脂质析

1．含量测定

直接精确测定磷脂质浓度比较困难干燥磷脂总含定量残留溶剂或其杂质磷脂广泛使用测定磷脂非直接例含磷量测定于制备脂质体数磷脂言每摩尔磷脂均含1mol磷仅别例外每摩尔磷脂含2mol磷品磷脂浓度通测定磷含量计算介绍二种磷测定

(1)Bartlett

磷脂机磷酸解机磷加入钼酸铵使转化磷钼酸磷钼酸用萘磺酸铵定量原蓝色蓝色强度由光光度测定与标准品(磷酸二氢钾)照即计算含磷量该灵敏度较高且重现性若品含少量机磷则干扰测定

(2)Stewart

脂质体混悬于磷酸盐缓冲液宜采用Stewart该利用磷脂机溶剂与亚铁硫氰酸铵形色复合物受机磷存影响进行测定计算使用与磷脂结构关转换吸收值换算磷脂毫克数该随磷脂基同异利用磷脂标准液绘制标准曲线计算该适于测定含未知磷脂混合物特别须指该能用于甘油磷脂测定若脂质体含卵磷脂甘油磷脂则用该前者定量再通Bartlett测定总磷脂计算甘油磷脂量

2．磷脂质薄层层析

薄层层析检查磷脂质纯度主要手段与所层析磷脂质薄层层析利用磷脂液态机相亲水性固定相同亲性液相固定相展同磷脂具同保留间根据亲水性强弱改变展剂组改变磷脂两相配系数用固定相硅胶展剂则用含氯仿溶剂①氯仿：甲醇：水：(65：25：4 V／V)；②氯仿：甲醇：水：氨水(65：35：2.5：2.5 V／V)；③氯仿：丙酮：甲醇：醋酸：水(6：8：2：2：1 V／V)；④乙酸乙酯：环烷(1：1 V／V)等用显色剂碘用50％硫酸 - 甲醇液或重铬酸钾液显色

(三)磷脂氧化程度

1．磷脂氧化

磷脂脂肪酸氧化主要由于游离基作用电磁波辐射或者微量游离金属离催化脂肪酸碳链首先脱氢原形游离基进与空气氧发连锁反应含双键碳链更易受影响聚合饱磷脂特别容易氧化降解含单或饱脂肪酸脂质混合物磷脂氧化三阶段进行：①单双键偶合；②氧化物形；③形乙醛及链断裂
值注意氧情况仍发游离基反应导致双重或三重偶合形产氧化物另外降解步程要消耗偶合双键终降解产物增加同笫步降解产物减少故难用种试验评估磷脂氧化程度甚至即使应用几同试验仍仅能致估计氧化程相速率

2．氧化指数测定

氧化指数用检测游离基偶合指标氧化偶合磷脂230nm左右具紫外吸收峰别于未氧化磷脂典型紫外吸收图谱图20－12

内提作制备脂质体膜材卵磷脂其氧化指数应控制0.2测定磷脂溶于水乙醇配定浓度澄明溶液别测定波233nm及215nm吸收值按式计算：
氧化指数 = A233nm／A215nm

3．氧化物测定

卵磷脂氧化产丙二醛及溶血磷脂等丙二醛(MDA)酸性条件与硫巴比妥酸(TBA)反应种红色染料(TBA-Pigment)

该化合物波535nm处特异吸收吸收值即反映磷脂氧化程度丙二醛量与溶血间关系进行研究实验证明每毫升含卵磷脂理盐水丙二醛含量超2.3μg37℃放置1～2h即产溶血
除述估计磷脂氧化程度外根据聚合饱脂肪酸链氧化阶段发断裂或缩短用气 - 液色谱解些酰基链变化

(四)胆固醇析

与磷脂质类似胆固醇纯度及其氧化产物用气 - 液色谱进行检测另外由于胆固醇论游离型酯化型都能与含高氯酸铁乙酸乙酯硫酸试剂反应铁复合物波610nm处紫外吸收采用标准胆固醇溶液照计算胆固醇量

六、脂质体灭菌

许研究论文都认脂质体宜用加热灭菌办且各类辐射及各种化灭菌剂敏所能使用滤灭菌或采用菌操作进行制备影响脂质体广泛应用于临床重要原
近内采用100℃ 30min湿热灭菌获功灭菌前脂质体形态及均明显变化渗漏率约5％另采用辐射灭菌即用60钴发γ射线三磷酸腺苷脂质体甲氨蝶呤脂质体作辐射灭菌照射剂量15～20kGy菌试验结均由试验前阳性转阴性脂质体粒径灭菌前显著变化灭菌所致渗漏率较
灭菌实用性能与混悬介质种类、磷脂组及纯度等关采用121℃加热20min灭菌处理几种脂质体发现理盐水脂质体发凝聚等渗糖溶液羟基化合物溶液发凝聚加热灭菌具较高氧化物值含蛋卵磷脂散液稍变黄改用具低氧化物值蛋卵磷脂、氢化蛋卵磷脂或DPPC则变化性pH充入氮气阻止颜色变化加入α-育酚效经0.4μm膜滤由蛋卵磷脂组脂质体变变化介质类型明显影响加热灭菌期间包裹羧基荧光素阴离负电荷脂质体(PC／chol／PG)发渗漏使用电荷脂质体(PC／chol／十八胺)仅加热灭菌期间发渗漏且贮存间渗漏
感觉这样的提问是没有意义的
还是自己找下资料吧

美国Genzyme人工合成磷脂在中国的长期供应商是西安瑞禧生物科技有限公司，以下资料由西安瑞禧科技提供。
美国Genzyme公司磷脂类产品列表：
DLPA,Na 1,2-Dilauroyl-sn-glycero-3-phosphate (Sodium Salt) LP-R4-121
DMPA,Na 1,2-Dimyristoyl-sn-glycero-3-phosphate (Sodium Salt) LP-R4-024
DPPA,Na 1,2-Dipalmitoyl-sn-glycero-3-phosphate (Sodium Salt) LP-R4-025
DSPA,Na 1,2-Distearoyl-sn-glycero-3-phosphate (Sodium Salt) LP-R4-026
DLPG,Na 1,2-Dilauroyl-sn-glycero-3Phospho-rac(1-glycerol)(Sodium Salt)
DMPG,Na 1,2-Dimyristoyl-sn-glycero-3Phospho-rac-(1-glycerol)(Sodium Salt)
DMPG,NH4 1,2-Dimyristoyl-sn-glycero-3Phospho-rac(1-glycerol)Ammonium Salt)
DPPG,Na 1,2-Dipalmitoyl-sn-glycero-3Phospho-rac-(1-glycerol)(Sodium Salt)
DSPG,Na 1,2-Distearoyl-sn-glycero-3[Phospho-rac-(1-glycerol)(Sodium Salt)
DPPS,Na 1,2-Dipalmitoyl-sn-glycero-3-phosphoserine (Sodium Salt)
DSPE 1,2-Distearoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine
DPPE 1,2-Dipalmitoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine
DOPE 1,2-Dioleoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine
DMPE 1,2-Dimyristoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine
DPPC 1,2-Dipalmitoyl-sn-glycero-3-phosphocholine
DPPC 1,2-Dipalmitoyl-sn-glycero-3-phosphocholine
注：以上磷脂纯度≥99%
公司：西安瑞禧生物科技有限公司

14760897047：为什么用缓冲液水化脂质体?
莘卢航 ：答：PH6.5时磷脂最稳定 其水解产物会使介质PH降低 从而可加速脂质体水解 所以制备时常选用缓冲液 以保持较稳定PH

14760897047：薄膜水化法制备脂质体的原理
莘卢航 ：答：薄膜水化法制备脂质体的原理将磷脂和胆固醇等类脂及脂溶性药物溶于有机溶剂，然后将此溶液置于一大的圆底烧瓶中，再旋转减压蒸干，磷脂在烧瓶内壁上会形成一层很薄的膜，然后加入一定量的缓冲溶液，充分振荡烧瓶使脂质膜水化脱落，即可得到脂质体。这种方法对水溶性药物可获得较高的包封率，但是脂质体粒径...

14760897047：制备脂质体水化直接用药物水溶液可以吗
莘卢航 ：答：注入法、薄膜分散法、超声波分散法、逆向蒸发法。脂质体作为药物载体的临床应用1、抗肿瘤药物载体：阿霉素脂质体和顺铂脂质体已在国外上市。2、抗寄生虫药物载体：苯硫咪唑脂质体和阿苯达唑脂质体等。利用脂质体的被动靶向性

14760897047：去离子水可以作为脂质体的水化介质吗
莘卢航 ：答：可以，去离子水可以作为脂质体的水化介质。脂质体指的是由磷脂等脂类物质和其他成分组成的微小空心球形结构，常常被用作药物传递和化妆品配方等领域。而去离子水因为经过特殊的处理过程已经去除了其中的离子和杂质，化学性质非常纯净，因此被广泛应用于生物医药领域的制备和实验工作中，特别适用于需要纯度、低...

14760897047：关于制备脂质体的问题
莘卢航 ：答：美国Genzyme人工合成磷脂在中国的长期供应商是西安瑞禧生物科技有限公司，以下资料由西安瑞禧科技提供。美国Genzyme公司磷脂类产品列表：DLPA,Na 1,2-Dilauroyl-sn-glycero-3-phosphate (Sodium Salt) LP-R4-121 DMPA,Na 1,2-Dimyristoyl-sn-glycero-3-phosphate (Sodium Salt) LP-R4-024 D...

14760897047：采用注入法制备载药脂质体时,对于脂溶性和水溶性药物分别该怎么_百度知 ...
莘卢航 ：答：例如乙醇、乙醚、甲醇、二氯甲烷等，待原辅料溶解完毕，将溶液快速注入到水性介质中，即可形成粗脂质体。2、对于水溶性药物，脂质体倾向于将其包裹在中心水相中，而将脂溶性药物包裹在双分子膜间的区域。另外还有一种方法是薄膜水化法，这种方法也适用于水溶性药物的装载。

14760897047：脂质体水化后可以超声破碎吗
莘卢航 ：答：可以。水化形成脂质体后，通常会通过高压均质或者超声的方式对样品进行初步均质处理，所以脂质体水化后可以超声破碎。脂质体是一种人工膜，是在水中磷脂分子亲水头部插入水中，脂质体疏水尾部伸向空气，搅动后形成双层脂分子的球形脂质体。

14760897047：薄膜水化法制备脂质体成败的关键是什么?
莘卢航 ：答：也有效抑 制了磷脂的氧化,并能稳定脂质体双分子层

14760897047：如何去掉掉溶液中的曲拉通
莘卢航 ：答：稀浓度可促进蛋白质的溶,称为盐溶作用.同时稀盐溶液因盐离子与蛋白质部分结合,具有保护蛋白质不易变性的优点,因此在提取液中加入少量NaCl等中性盐,一般以0.15摩尔.升浓度为宜.缓冲液常采用0.02-0.05M磷酸盐和碳酸盐等渗盐溶液. (二)有机溶剂提取法 一些和脂质结合比较牢固或分子中非极性侧链较多的蛋白质和酶,...

14760897047：继续一篇关于蛋白质组学的论文
莘卢航 ：答：有研究人员在等电聚焦缓冲液中加入SB310以增加膜蛋白的溶解性. 在等电聚焦前对样品进行有机酸处理也可以增加膜蛋白的溶解性. 在研究中人们发现,不同的样品应该选用不同的裂解液,没有一种裂解液能够适合于所有的膜蛋白质.百事通针对膜蛋白质的难溶和等电聚焦时的沉淀,一些研究人员另辟径,避开双相电泳而进行一维...