中国药典微生物限度检查法的稀释液和培养基制备方法

检验量即一次试验所用的供试品量（g、ml或cm²）。除另有规定外，一般供试品的检验量为10g或10ml；膜剂为100cm²；贵重药品、微量包装药品的检验量可以酌减。要求检查沙门菌的供试品，其检验量应增加20g或20ml（其中10g或10ml用于阳性对照试验）。检验时,应从2个以上最小包装单位中抽取供试品，膜剂还不得少于4片。一般应随机抽取不少于检验用星（两个以上最小包装单位）的3倍最供试品。 根据供试品的理化特性与生物学特性，采取适宜的方法制备供试液。供试液制备若需加温时，应均匀加热，且温度不应超过45℃。供试液从制备至加入检验用培养基，不得超过1小时。除另有规定外，常用的供试液制备方法如下。1.液体供试品取供试品10ml，加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，混匀，作为l:10的供试液。油剂可加入适量的无菌聚山梨酯80使供试品分散均匀。水溶性液体制剂也可用混合的供试品原液作为供试液。2.固体、半固体或黏稠性供试品取供试品10g，加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，用匀浆仪或其他适宜的方法，混匀，作为1:10的供试液。必要时加适量的无菌聚山梨酯80，并置水浴中适当加温使供试品分散均匀。3.需用特殊方法制备供试液的供试品（1）非水溶性供试品方法1 取供试品5g（或5ml )，加至含溶化的（温度不超过45℃）5g司盘80、3g单硬脂酸甘油酯、10g聚山梨酯80无菌混合物的烧杯中，用无菌玻棒搅拌成团后，慢慢加人45 ℃的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，边加边搅拌，使供试品充分乳化，作为1 : 20的供试液。方法2 取供试品10g，加至含20ml无菌十四烷酸异丙酯（制法见附录XII A无菌检查法中供试品的无菌检查项下）和无菌玻璃珠的适宜容器中．必要时可增加十四烷酸异丙酯的用量，充分振摇，使供试品溶解。然后加入45 ℃的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液100ml，振摇5～10分钟，萃取，静置使油水明显分层，取其水层作为l : 10的供试液。（2）膜剂供试品取供试品100cm²，剪碎，加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液100ml（必要时可增加稀释液），浸泡，振摇，作为1:10的供试液。（3）肠溶及结肠溶制剂供试品取供试品10g，加pH6.8无菌磷酸盐缓冲液（用于肠溶制剂）或pH7.6无菌磷酸盐缓冲液（用于结肠溶制剂）至100ml，置45 ℃水浴中，振摇，使溶解，作为1 :10的供试液。（4）气雾剂、喷雾剂供试品取规定量供试品，置冰冻室冷冻约1小时，取出，迅速消毒供试品开启部位，用无菌钢锥在该部位钻一小孔，放至室温，并轻轻转动容器，使抛射剂缓缓全部释出。用无菌注射器吸出全部药液，加至适量的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液（若含非水溶性成分，加适觉的无菌聚山梨酯80）中，混匀，取相当于10g或10ml的供试品，再稀释成1:10的供试液。（5）贴剂供试品取规定量供试品，去掉贴剂的保护层，放置在无菌玻璃或塑料片上，粘贴面朝上。用适宜的无菌多孔材料（如无菌纱布）覆盖贴剂的粘贴面，以避免贴剂粘贴在一起。然后将其置于适宜体积并含有表面活性剂（如聚山梨酯80或卵磷脂）的稀释剂中，用力振荡至少30分钟，制成供试液。贴剂也可采用其他适宜的方法制备成供试液。（6）具抑菌活性的供试品当供试品有抑菌活性时，采用下列方法进行处理，以消除供试液的抑菌活性，再依法检查。常用的方法如下。①培养基稀释法取规定量的供试液，至较大量的培养基中，使单位体积内的供试品含量减少，至不含抑菌作用。测定细菌、霉菌及酵母菌的菌数时，取同稀释级的供试液2ml，每1ml供试液可等量分注多个平皿，倾注琼脂培养基，混匀，凝固，培养，计数。每1ml供试液所注的平皿中生长的菌落数之和即为1ml的菌落数，计算每1ml供试液的平均菌落数，按平皿法计数规则报告菌数；控制菌检查时，可加大增菌培养基的用量。②离心沉淀法取一定量的供试液，500转/分钟离心3分钟，取全部上清液混合。用于细菌检查。③薄膜过滤法见细菌、霉菌及酵母菌计数项下的“薄膜过滤法”。④中和法凡含汞、砷或防腐剂等具有抑菌作用的供试品，可用适宜的中和剂或灭活剂消除其抑菌成分。中和剂或灭活剂可加在所用的稀释液或培养基中。

计数方法包括平皿法和薄膜过滤法。检查时，按已验证的计数方法进行供试品的细菌、霉菌及酵母菌菌数的测定。按计数方法的验证试验确认的程序进行供试液制备。用稀释液稀释成1:10、1:l0²、l:10³等稀释级的供试液。 根据菌数报告规则取相应稀释级的供试液1ml，置直径90mm的无菌平皿中，注人15～20ml温度不超过45 ℃的溶化的营养琼脂培养基或玫瑰红钠琼脂培养基或酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基，混匀，凝固，倒置培养。每稀释级每种培养基至少制备2个平板。阴性对照试验取试验用的稀释液1ml，置无菌平皿中．注入培养基，凝固，倒置培养。每种计数用的培养基各制备2个平板，均不得有菌生长。培养和计数除另有规定外，细菌培养3天，霉菌、酵母菌培养5天，逐日观察菌落生长情况，点计菌落数，必要时，可适当延长培养时间至7天进行菌落计数并报告。菌落蔓延生长成片的平板不宜计数。点计菌落数后，计算各稀释级供试液的平均菌落数，按菌数报告规则报告菌数。若同稀释级两个平板的菌落平均数不小于15．则两个平板的菌落数不能相差l倍或以上。一般营养琼脂培养基用于细菌计数；玫瑰红钠琼脂培养基用于霉菌及酵母菌计数；酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基用于酵母菌计数。在特殊情况下．若营养琼脂培养基上长有霉菌和酵母菌、玫瑰红钠琼脂培养基上长有细菌，则应分别点计霉菌和酵母菌、细菌菌落数。然后将营养琼脂培养基上的霉菌和酵母菌数或玫瑰红钠琼脂培养基上的细菌数，与玫瑰红钠琼脂培养基中的霉菌和酵母菌数或营养琼脂培养基中的细菌数进行比较，以菌落数高的培养基中的菌数为计数结果。含蜂蜜、王浆的液体制剂，用玫瑰红钠琼脂培养基测定霉菌数，用酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基测定酵母菌数，合并计数。菌数报告规则细菌、酵母菌宜选取平均菌落数小于300cfu、霉菌宜选取平均菌落数小于100cfu的稀释级，作为菌数报告（取两位有效数字）的依据。以最高的平均菌落数乘以稀释倍数的值报告1g、lml或10cm²供试品中所含的菌数。如各稀释级的平板均无菌落生长，或仅最低稀释级的平板有菌落生长，但平均菌落数小于1时，以<1乘以最低稀释倍数的值报告菌数。 采用薄膜过滤法，滤膜孔径应不大于0.45μm，直径一般为50mm，若采用其他直径的滤膜．冲洗量应进行相应的调整。选择滤膜材质时应保证供试品及其溶剂不影响微生物的充分被截留。滤器及滤膜使用前应采用适宜的方法灭菌。使用时，应保证滤膜在过滤前后的完整性。水溶性供试液过滤前先将少量的冲洗液过滤以润湿滤膜。油类供试品，其滤膜和滤器在使用前应充分干燥。为发挥滤膜的最大过滤效率，应注意保持供试品溶液及冲洗液覆盖整个滤膜表面。供试液经薄膜过滤后，若需要用冲洗液冲洗滤膜，每张滤膜每次冲洗量为100ml。总冲洗量不得超过1000ml.， 以避免滤膜上的微生物受损伤。取相当于每张滤膜含lg、lml或10cm²供试品的供试液，加至适量的稀释剂中，混匀，过滤。若供试品每1g、lml或10cm²所含的菌数较多时，可取适宜稀释级的供试液lml进行试验。用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或其他适宜的冲洗液冲洗滤膜，冲洗方法和冲洗量同“计数方法的验证”。冲洗后取出滤膜，菌面朝上贴于营养琼脂培养基或玫瑰红钠琼脂培养基或酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基平板上培养。每种培养基至少制备一张滤膜。阴性对照试验取试验用的稀释液lml，照上述薄膜过滤法操作，作为阴性对照。阴性对照不得有菌生长。培养和计数培养条件和计数方法同平皿法，每片滤膜上的菌落数应不超过100cfu。菌数报告规则以相当于1g、lml或10cm²供试品的菌落数报告菌数；若滤膜上无菌落生长，以<1报告菌数（每张滤膜过滤1g、lml或10cm²供试品），或<l乘以稀释倍数的值报告菌数。

稀释液配制后，应采用验证合格的灭菌程序灭菌。
1 .pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液
照无菌检查法（附录XII A）制备。
2.pH6.8无菌磷酸盐缓冲液、pH7.6无菌磷酸盐缓冲液
按缓冲液（二部附录XV D）配制后，过滤，分装，灭菌。
如需要，可在上述稀释液灭菌前或灭菌后加入表面活性剂或中和剂等。
3.0.9%无菌氯化钠溶液
取氯化钠9.0g，加水溶解使成1000ml，过滤，分装，灭菌。 培养基可按以下处方制备，也可使用按该处方生产的符合要求的脱水培养基。配制后，应采用验证合格的灭菌程序灭菌。
1.营养琼脂培养基、营养肉汤培养基、硫乙醇酸盐流体培养基、改良马丁培养基及改良马丁琼脂培养基
照无菌检查法（附录XII A）制备。
2.玫瑰红钠琼脂培养基
胨 5.0g
玫瑰红钠 0.0133g
葡萄糖 10.0g
琼脂 14.0g
磷酸二氢钾 1.0g
水 1000ml
硫酸镁 0.5g
除葡萄糖、玫瑰红钠外，取上述成分，混合，微温溶解，滤过，加入葡萄糖、玫瑰红钠，分装．灭菌。
3.酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基（YPD )
胨 10.0g
琼脂 14.0g
酵母浸出粉 5.0g
水 1000ml
葡萄糖 20.0g
除葡萄糖外，取上述成分．混合，微温溶解，滤过，加人葡萄糖，分装．灭菌。
4．胆盐乳糖培养基(BL )　　胨20.0g
磷酸二氢钾 1.3g
乳糖 5.0g
牛胆盐 2.0g
氯化钠 5.0g
（或去氧胆酸钠） ( 0.5g)
磷酸氢二钾 4.0g
水 1000ml
除乳糖、牛胆盐或去氧胆酸钠外，取上述成分，混合，微温溶解，调节pH值使灭菌后为7.4 ±0.2，煮沸，滤清，加人乳糖、牛胆盐或去氧胆酸钠，分装，灭菌。
5.乳糖胆盐发酵培养基
胨 20.0g
0.04%溴甲酚紫指示液 25ml
乳糖 10.0g
水 l000ml
牛胆盐 5.0g
除0.04%溴甲酚紫指示液外，取上述成分，混合，微温溶解，调节pH值使灭菌后为7.4 ±0.2，加人0.04%溴甲酚紫指示液，根据要求的用量分装于含倒管的试管中。灭菌。所用倒管的规格应保证产气结果的观察。
6．曙红亚甲蓝琼脂培养基（EMB )
营养琼脂培养基 100ml
曙红钠指示液 2ml
20%乳糖溶液 5ml
亚甲蓝指示液 1.3～1.6ml
取营养琼脂培养基，加热溶化后，冷至60℃，按无菌操作加入灭菌的其他3种溶液，摇匀，倾注平皿。
7.麦康凯琼脂培养基（MacC）　　胨20.0g
1%中性红指示液 3ml
乳糖 10.0g
琼脂 14.0g
牛胆盐 5.0g
水 l000ml
氯化钠 5.0g
除乳糖、1%中性红指示液、牛胆盐及琼脂外，取上述成分，混合，微温溶解，调节pH值使灭菌后为7.2 ±0.2，加入琼脂，加热溶化后，再加入其余各成分，摇匀，分装，灭菌，冷至约60℃，倾注平皿。
8.4 -甲基伞形酮葡糖昔酸（4-methylumbelliferyl-β-D-glucuionide，MUG）培养基
胨 10.0g
磷酸二氢钾（无水） 0.9g
硫酸锰 0.5mg
磷酸氢二钠（无水） 6.2g
硫酸锌 0.5mg
亚硫酸钠 40mg
硫酸镁 0.1g
去氧胆酸钠 1.0g
氯化钠 5.0g
MUG 75mg
氯化钙 50mg
水 l000ml
除MUG外，取上述成分，混合，微温溶解，调节pH值使灭菌后为7.3±0.1，加人MUG，溶解，每管分装5ml，灭菌。
9.三糖铁琼脂培养基（TSI )
胨 20.0g
牛肉浸出粉 5.0g
乳糖 10.0g
蔗糖 10.0g
葡萄糖 1.0g
氯化钠 5.0g
硫酸亚铁 0.2g
硫代硫酸钠 0.2g
0.2%酚磺酞指示液 12.5ml
琼脂 12.0g
水 1000ml
除三种糖、0.2%酚磺酞指示液、琼脂外，取上述成分，混合，微温溶解，调节pH值使灭菌后为7.3±0.1,加入琼脂，加热溶化后，再加入其余各成分，摇匀，分装，灭菌，制成高底层（2～75px）短斜面。
10．四硫磺酸钠亮绿培养基（TTB）
胨 5.0g
硫代硫酸钠 30.0g
牛胆盐 1.0g
水 l000ml
碳酸钙 10.0g
取上述成分，混合，微温溶解，灭菌。
临用前，取上述培养基，每10ml加入碘试液0.2ml和亮绿试液0.lml，混匀。
11.沙门、志贺菌属琼脂培养基（SS）
胨 5.0g
硫代硫酸钠 8.5g
牛肉浸出粉 5.0g
中性红指示液 2.5ml
乳糖 10.0g
亮绿试液 0.33ml
牛胆盐 8.5g
琼脂 16.0g
枸橼酸钠 8.5g
水 1000ml
枸橼酸铁铵 1.0g
除乳糖、中性红指示液、琼脂外，取上述成分，混合，微温溶解，调节pH值使灭菌后为7.2±0.1,滤过，加入琼脂，加热溶化后，再加入其余各成分，摇匀，灭菌，冷至60℃，倾注平皿。
12．胆盐硫乳琼脂培养基（DHL )
胨 20.0g
枸橼酸钠 1.0g
牛肉浸出粉 3.0g
枸橼酸铁铵 1.0g
乳糖 10.0g
中性红指示液 3ml
蔗糖 10.0g
琼脂 16.0g
去氧胆酸钠 1.0g
水 l000ml
硫代硫酸钠 2.3g
除糖、指示液及琼脂外，取上述成分，混合，微温溶解，调节pH值使灭菌后为7.2±0.1,加入琼脂，加热溶化后，再加人其余成分，摇匀，冷至60 ℃，倾注平皿。
13.溴化十六烷基三甲铵琼脂培养基
胨 10.0g
溴化十六烷基三甲铵 0.3g
牛肉浸出粉 3.0g
琼脂 14.0g
氯化钠 5.0g
水 l000ml
除琼脂外，取上述成分，混合，微温溶解，调节pH值使灭菌后为7.5±0.1，加入琼脂，加热溶化后，分装，灭菌，冷至60 ℃，倾注平皿。
14．亚碲酸盐肉汤培养基
临用前，取灭菌的营养肉汤培养基，每100ml中加人新配制的1%亚谛酸钠（钾）试液0.2ml，混匀，即得。
15．卵黄氯化钠琼脂培养基
胨 6.0g
10%氯化钠卵黄液 100ml
牛肉浸出粉 1.8g
琼脂 14.0g
氯化钠 30.0g
水 650ml
除10 %氯化钠卵黄液外，取上述成分，混合，微温溶解，调节pH值使灭菌后为7.6土0 .1，灭菌，待冷至约60 ℃，以无菌操作加入10%氯化钠卵黄液，充分振摇，倾注平皿。
10%氯化钠卵黄液的制备取新鲜鸡蛋1个，以无菌操作取出卵黄，放入10%无菌氯化钠溶液100ml中，充分振摇，即得。
16.甘露醇氯化钠琼脂培养基
胨 10.0g
酚磺酞指示液 2.5ml
牛肉浸出粉 1.0g
琼脂 14.0g
甘露醇 10.0g
水 l000ml
氯化钠 75.0g
除甘露醇、酚磺酞指示液及琼脂外，取上述成分，混合，微温溶解，调节州值使灭菌后为7.4 ±0.2，加入琼脂，加热溶化后，滤过，分装，灭菌，冷至60 ℃，倾注平皿。
17．乳糖发酵培养基
胨 20.0g
乳糖 10.0g
0.04%溴甲酚紫指示液 25ml
水 l000ml
除0.04%溴甲酚紫指示液外，取上述成分，混合，微温溶解，调节pH值使灭菌后为7.2±0.2，加入指示液，分装于含倒管的小试管中，每管3ml．灭菌。
18．绿脓菌素（Pyocyanin）测定用培养基（PDP琼脂培养基）
胨 20.0g
甘油 l0ml
氯化镁（无水） 1.4g
琼脂 14.0g
硫酸钾（无水） 10.0g
水 1000ml
取胨、氯化镁、硫酸钾和水混合，微温溶解，调节pH值使灭菌后为7.3±0.1，加入甘油及琼脂，加热溶化，混匀，分装于试管，灭菌，置成斜面。
19.梭菌增菌培养基
牛肉浸出粉 10.0g
盐酸半胱氨酸 0.5g
胨 10.0g
氯化钠 5.0g
酵母浸出粉 3.0g
醋酸钠 3.0g
可溶性淀粉 1.0g
琼脂 0.5g
葡萄糖 5.0g
水 1000ml
取上述成分，混合，加热煮沸使溶解，调节pH值使灭菌后为6.8士0.2，加热溶化，滤过，分装，灭菌。
20.哥伦比亚琼脂培养基
酪蛋白胰酶消化物 10.0g
肉胃酶消化物 5.0g
心胰酶消化物 3.0g
酵母浸出粉 5.0g
玉米淀粉 1.0g
氯化钠 5.0g
琼脂 15.0g
水 1000ml
除琼脂外，取上述成分，混合，微温溶解，调节pH值使灭菌后为7.3士0.2，加入琼脂，加热溶化，滤过，分装，灭菌，冷至45～50 ℃，加人相当于20mg庆大霉素的无菌硫酸庆大霉素，混匀，倾注平皿。
21．沙氏葡萄糖液体培养基
胨 10g
葡萄糖 40g
水 1000ml
除葡萄糖外，取上述成分，混合，微温溶解，滤过。加人葡萄糖，溶解，分装，灭菌。
22．沙氏葡萄糖琼脂培养基
胨 10g
水 1000ml
葡萄糖 40g
琼脂 14g
除琼脂和葡萄糖外，混合，微温溶解，滤过。加入琼脂和葡萄糖，溶解，分装，灭菌。
23.（科玛嘉）念珠菌显色培养基（注1）
胨 10.2g
琼脂 15g
氢罂素 0.5g
灭菌水 1000ml
色素 22.0g
除琼脂外，取上述成分，混合，微温溶解，调节pH值至6.3士0.2。滤过，加入琼脂，加热煮沸，不断搅拌至琼脂完全溶解，倾注平皿。
24.1%聚山梨酯80-玉米琼脂培养基
黄色玉米粉 40g
琼脂 10～15g
聚山梨酯80 10ml
水 1000ml
取玉米粉、聚山梨酯80及蒸馏水500ml，混合，65℃加热30分钟，混匀，用纱布滤过，补足原水量。取琼脂，水500ml，混合，加热溶解。将以上两种溶液混合，摇匀，分装，灭菌。

13763901334：中国药典微生物限度检查法的稀释液和培养基制备方法
项钥壮 ：答：除10 %氯化钠卵黄液外,取上述成分,混合,微温溶解,调节pH值使灭菌后为7.6土0 .1,灭菌,待冷至约60 ℃,以无菌操作加入10%氯化钠卵黄液,充分振摇,倾注平皿。10%氯化钠卵黄液的制备取新鲜鸡蛋1个,以无菌操作取出卵黄,放入10%无菌氯化钠溶液100ml中,充分振摇,即得。16.甘露醇氯化钠琼脂培养基胨10.0g酚磺酞指示...

13763901334：想请教做微生物检查时,配制供试品时用的稀释液---0.9%无菌氯化钠溶液和...
项钥壮 ：答：0.9%无菌氯化钠溶液（精确点应该是0.85%）就是生理盐水，特点是其渗透压和人体血液相当，在这种情况下，呆溶液中的微生物就相当于呆在血液中，不会因为渗透压而吸水破裂。无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液其最主要特点是“缓冲”，也就是Ph值在缓冲作用下不会一下子变化非常大，当然调节渗透压的作用也是有...

13763901334：中国药典微生物限度检查法的供试品检查
项钥壮 ：答：检查时，按已验证的计数方法进行供试品的细菌、霉菌及酵母菌菌数的测定。按计数方法的验证试验确认的程序进行供试液制备。用稀释液稀释成1:10、1:l0²、l:10³等稀释级的供试液。 根据菌数报告规则取相应稀释级的供试液1ml，置直径90mm的无菌平皿中，注人15～20ml温度不超过45 ℃的...

13763901334：微生物限度检查法 怎么做十倍递增稀释 分别为1:10 1:100 1:1000 样品...
项钥壮 ：答：缓冲液加10ml，1:10ml为十的一次，再取此溶液1ml加10ml稀释为1:100，再取稀释为1:100的溶液1ml，加稀释液10ml，为1:1000，懂？望采纳，谢谢。

13763901334：微生物限度检查中,稀释剂对照组和菌液组有什么区别
项钥壮 ：答：微生物限度检查中，稀释剂对照组主要考察试验系统的对试验结果的干扰及影响；菌液组，俗称阳性对照组，就是考察在人工污染的情况下，在当前的检验量以及检验条件下，试验菌是否能正常生长，以此来判断系统对检查结果的影响，试验是否具有真实性、科学性。

13763901334：中国药典无菌检查法的稀释液和冲洗液
项钥壮 ：答：稀释液、冲洗液配制后应采用验证合格的灭菌程序灭菌。1．0.1%蛋白胨水溶液取蛋白胨1.0g，加水1000ml，微温溶解，滤清，调节pH值至7.1±0.2，分装，灭菌。2．pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液取磷酸二氢钾3.56g，磷酸氢二钠7.23g，氯化钠4.30g，蛋白胨1.0g，加水1000ml，微温溶解，滤清，分装，...

13763901334：微生物限度检查法 怎么做十倍递增稀 释 分别为1:10 1:100 1:1000_百度...
项钥壮 ：答：可以根据样品的具体情况，在无菌情况下取25g样品，然后放到225ml/g的生理盐水中进行混匀或打匀，这就是10倍稀释，然后用干净吸管取1ml，放入9ml生理盐水中，用新的吸管混匀，这就是100倍稀释液；直接取1ml放入9ml生理盐水中，混匀，即1000倍稀释液，以此类推。

13763901334：2010版药典附录微生物限度检查法中,可选用的稀释剂有哪些
项钥壮 ：答：1 硝基漆稀释剂 X-1 该稀释剂可作硝基清漆、磁漆、底漆稀释之用 该稀释剂中含酯、酮溶剂比例较高，溶解性能好 2 硝基漆稀释剂 X-2 可作要求不高的硝基漆及底漆的稀释剂，或用于洗涤硝基漆施工工具及用品等 该稀释剂含酯、酮类溶剂比例低，溶解性能稍差 3 过氯乙烯...

13763901334：微生物限度法怎样去稀释级别10倍,100倍,1000倍
项钥壮 ：答：很简单。取1ml吸管，在样品中吸取1ml，放入9ml无菌生理盐水中，就稀释了10倍了。再取1ml10倍的稀释液，放入9ml无菌生理盐水中，就稀释100倍了。依此类推，稀释任何倍数都可以。

13763901334：2015药典四部稀释液配制
项钥壮 ：答：2015版药典中微生物限度检查方法验证要求： 1.试验组 取上述制备好的供试液，加入试验菌液，混匀，使每1ml供试液或每张滤膜所滤过的供试液中含菌量不大于100cfu。2.若因供试品抗菌活性或溶解性较差的原因导致无法选择最低稀释级的供试液进行方。