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基因表达载体的构建需要哪些工具酶

来源:www.zuowenzhai.com    作者:编辑   日期:2024-06-15
构建基因表达载体需要哪些工具

大致需要以下几种东西:(1)原始表达载体,用以把目的基因连上去;(2)扩增目的基因的模板;(3)核酸内切酶,用于切割载体和目的基因;(4)连接酶,用于连接目的基因和载体;(5)大肠杆菌感受态,用于转化筛选阳性克隆。

A、基因工程的核心步骤是基因表达载体的构建,A正确;B、基因工程常用的工具酶是限制酶和DNA连接酶,B正确;C、基因治疗目前处于初期的临床试验阶段,C错误;D、常用感受态细胞法将目的基因导入大肠杆菌,D错误.故选:AB.

  在构建基因表达载体时要用到的工具酶有限制酶和DNA连接酶。
  基因表达载体的构建(即目的基因与运载体结合)是实施基因工程的第二步,也是基因工程的核心。其构建目的是使目的基因能在受体细胞中稳定存在,并且可以遗传给下一代,同时,使目的基因能够表达和发挥作用。
  过程:
  首先要用一定的限制酶切割质粒,使质粒出现一个缺口,露出黏性末端。然后用同

  一种限制酶切断目的基因,使其产生相同的黏性末端(部分限制性内切酶可切割出平末端,拥有相同效果)。将切下的目的基因的片段插入质粒的切口处,首先碱基互补配对结合,两个黏性末端吻合在一起,碱基之间形成氢键,再加入适量DNA连接酶,催化两条DNA链之间形成磷酸二酯键,从而将相邻的脱氧核糖核酸连接起来,形成一个重组DNA分子。如人的胰岛素基因就是通过这种方法与大肠杆菌中的质粒DNA分子结合,形成重组DNA分子(也叫重组质粒)的。

限制性核酸内切酶或限制酶——比作剪刀 DNA连接酶——比作针线(包括T4DNA连接酶 热稳定DNA连接酶等) 楼上的说的不对
这还有几种酶的比较 有兴趣就看看 希望采纳
  
限制性核酸内切酶(以下简称限制酶):限制酶主要存在于微生物(细菌、霉菌等)中.一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列,并且能在特定的切点上切割DNA分子.是特异性地切断DNA链中磷酸二酯键的核酸酶(“分子手术刀”).发现于原核生物体内,现已分离出100多种,几乎所有的原核生物都含有这种酶.是重组DNA技术和基因诊断中重要的一类工具酶.例如,从大肠杆菌中发现的一种限制酶只能识别GAATTC序列,并在G和A之间将这段序列切开.目前已经发现了200多种限制酶,它们的切点各不相同.苏云金芽孢杆菌中的抗虫基因,就能被某种限制酶切割下来.在基因工程中起作用.   DNA连接酶:主要是连接DNA片段之间的磷酸二酯键,起连接作用,在基因工程中起作用.   DNA聚合酶:主要是连接DNA片段与单个脱氧核苷酸之间的磷酸二酯键,在DNA复制中起做用.   DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核酸片段的3′末端的羟基上,形成磷酸二酯键;而DNA连接酶是在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键,不是在单个核苷酸与DNA片段之间形成磷酸二酯键.   DNA聚合酶是以一条DNA链为模板,将单个核苷酸通过磷酸二酯键形成一条与模板链互补的DNA链;而DNA连接酶是将DNA双链上的两个缺口同时连接起来.因此DNA连接酶不需要模板. DNA连接
RNA聚合酶(又称RNA复制酶、RNA合成酶)的催化活性:RNA聚合酶以完整的双链DNA为模板,转录时DNA的双链结构部分解开,转录后DNA仍然保持双链的结构.真核生物RNA聚合酶:真核生物的转录机制要复杂得多,有三种细胞核内的RNA聚合酶:RNA聚合酶I转录rRNA,RNA聚合酶II转录mRNA,RNA聚合酶III转录tRNA和其它小分子RNA.在RNA复制和转录中起作用.   反转录酶:RNA指导的DNA聚合酶,具有三种酶活性,即RNA指导的DNA聚合酶,RNA酶,DNA指导的DNA聚合酶.在分子生物学技术中,作为重要的工具酶被广泛用于建立基因文库、获得目的基因等工作.在基因工程中起作用.   解旋酶:是一类解开氢键的酶,由水解ATP来供给能量它们常常依赖于单链的存在,并能识别复制叉的单链结构.在细菌中类似的解旋酶很多,都具有ATP酶的活性.大部分的移动方向是5'→3',但也有3'→5'移到的情况,如n'蛋白在φχ174以正链为模板合成复制形的过程中,就是按3'→5'移动.在DNA复制中起做用.   DNA限制酶作用于磷酸二酯键   DNA连接酶作用于磷酸二酯键   DNA聚合酶作用于磷酸二酯键   DNA解旋酶作用于氢键

限制性核酸内切酶或限制酶——比作剪刀 DNA连接酶——比作针线(包括T4DNA连接酶 热稳定DNA连接酶等) 楼上的说的不对

这还有几种酶的比较 有兴趣就看看 希望采纳
  

限制性核酸内切酶(以下简称限制酶):限制酶主要存在于微生物(细菌、霉菌等)中。一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列,并且能在特定的切点上切割DNA分子。是特异性地切断DNA链中磷酸二酯键的核酸酶(“分子手术刀”)。发现于原核生物体内,现已分离出100多种,几乎所有的原核生物都含有这种酶。是重组DNA技术和基因诊断中重要的一类工具酶。例如,从大肠杆菌中发现的一种限制酶只能识别GAATTC序列,并在G和A之间将这段序列切开。目前已经发现了200多种限制酶,它们的切点各不相同。苏云金芽孢杆菌中的抗虫基因,就能被某种限制酶切割下来。在基因工程中起作用。   DNA连接酶:主要是连接DNA片段之间的磷酸二酯键,起连接作用,在基因工程中起作用。   DNA聚合酶:主要是连接DNA片段与单个脱氧核苷酸之间的磷酸二酯键,在DNA复制中起做用。   DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核酸片段的3′末端的羟基上,形成磷酸二酯键;而DNA连接酶是在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键,不是在单个核苷酸与DNA片段之间形成磷酸二酯键。   DNA聚合酶是以一条DNA链为模板,将单个核苷酸通过磷酸二酯键形成一条与模板链互补的DNA链;而DNA连接酶是将DNA双链上的两个缺口同时连接起来。因此DNA连接酶不需要模板。 DNA连接
RNA聚合酶(又称RNA复制酶、RNA合成酶)的催化活性:RNA聚合酶以完整的双链DNA为模板,转录时DNA的双链结构部分解开,转录后DNA仍然保持双链的结构。真核生物RNA聚合酶:真核生物的转录机制要复杂得多,有三种细胞核内的RNA聚合酶:RNA聚合酶I转录rRNA,RNA聚合酶II转录mRNA,RNA聚合酶III转录tRNA和其它小分子RNA。在RNA复制和转录中起作用。   反转录酶:RNA指导的DNA聚合酶,具有三种酶活性,即RNA指导的DNA聚合酶,RNA酶,DNA指导的DNA聚合酶。在分子生物学技术中,作为重要的工具酶被广泛用于建立基因文库、获得目的基因等工作。在基因工程中起作用。   解旋酶:是一类解开氢键的酶,由水解ATP来供给能量它们常常依赖于单链的存在,并能识别复制叉的单链结构。在细菌中类似的解旋酶很多,都具有ATP酶的活性。大部分的移动方向是5'→3',但也有3'→5'移到的情况,如n'蛋白在φχ174以正链为模板合成复制形的过程中,就是按3'→5'移动。在DNA复制中起做用。   DNA限制酶作用于磷酸二酯键   DNA连接酶作用于磷酸二酯键   DNA聚合酶作用于磷酸二酯键   DNA解旋酶作用于氢键


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14786564260...根据如图回答有关问题.(1)基因表达载体的构建需要
费支俗答:(1)构建基因表达载体时,首先需要用限制酶切割含有目的基因的外源DNA分子和运载体,其次还需要用DNA连接酶将目的基因和运载体连接形成重组DNA分子.基因表达载体的组成包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等.(2)在体外受精前,要对精子进行获能处理.(3)将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微...

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费支俗答:核移植、动物细胞培养和胚胎移植等相关技术,基因工程属于分子水平,胚胎移植属于个体水平的操作,核移植和动物细胞培养属于细胞水平的操作.利用该基因工程获得动物是转基因动物,核移植获得的动物是克隆动物,因此属于转基因克隆动物(牛).(2)构建基因表达载体需要用限制性核酸内切酶、DNA连接酶等工具酶....

14786564260目的基因重组表达载体的构建及在原核中的表达
费支俗答:目的基因重组表达载体的构建是将目的基因与适当的调控序列(如启动子、转录终止信号序列等)和标记基因连接在一起,形成重组表达载体。这个过程通常需要使用限制性核酸内切酶和连接酶等工具酶,以确保重组载体的正确性和稳定性。在原核细胞中表达目的基因,需要将重组表达载体导入到原核细胞中,并在适当的条件...

14786564260...号”主要培育流程,据图回答:(1)①过程需要的工具酶是__
费支俗答:(1)图中①表示基因表达载体的构建,该过程需要利用限制酶和DNA连接酶.④过程表示利用植物组织培养技术培养转基因植物.(2)蛋白质工程指以蛋白质的结构规律及其与生物功能的关系作为基础,通过基因修饰或基因合成,对现有蛋白质进行基因改造,或制造一种心的蛋白质,以满足人类的生产和生活的需要.蛋白...

14786564260下列关于基因表达载体构建的相关叙述,不正确的是
费支俗答:【答案】B 【答案解析】试题分析:基因表达载体构建过程中需要限制酶和DNA连接酶两种工具酶的协助,A正确;基因工程的操作是在体外条件下进行的,B错误;抗生素抗性基因或荧光标记基因可作为标记基因,C正确;基因表达载体包括启动子、终止子、目的基因、标记基因,其中启动子位于目的基因的首端,终止子位于...


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