wb封闭液怎么配
wb封闭后可以隔天再敷一抗吗
：答：封闭剂通常含有BSA，也可以使用羊血清蛋白，封闭液的使用可以避免非特异性蛋白的结合，提高实验的可靠性。当完成一抗孵育后，可以去除封闭液，用水洗膜，然后加入新鲜的一抗溶液进行孵育，这样做可以在保证实验效果的同时，减少一抗的用量，从而减少浪费，所以wb封闭后可以隔天再敷一抗。
wb牛奶封闭太久如何补救
：答：wb牛奶封闭太久如何补救方法如下：1、从头到尾仔仔细细捋一遍步骤，读完试剂说明书。2、抗结合抗原之后普通洗涤液洗个10个小时都很难洗掉，一抗不会跟封闭液结合，我们经常拿封闭液稀释一抗和二抗，其实你直接孵二抗也没问题，影响不大。
western blot中,封闭液封闭完成后,需要用PBS或PBST洗涤滤膜,然后进行...
：答：一抗孵育完成后洗膜是为了洗掉未和膜结合的抗体，而不是磷酸盐。只有洗干净非特异性结合在膜上的一抗，加二抗时才不会因非特异结合而呈现很重的背景。至于是使用PBS(T)还是TBS(T)，这要具体看你的二抗种类。PBS不适合AP系列,PBS/TBSS适合AP和HRP体系。另外,做磷酸化蛋白的WB,PBS不合适....
WB封闭温度和时间
：答：WB封闭温度是38度1个小时就可以了。 如果是自己配置的封闭液，最好过滤一下以消除固体杂质。
0.5%H202/甲醇怎么配
：答：1．胃蛋白酶(×10；Pepsin ) 2m1； 2．预杂交液2m1； 3．以CATHEPSIN B寡核苷酸探针杂交液 2m1； 4．封闭液 5m1； 5．生物素化鼠抗地高辛 5m1；6．SABC—POD 5m1；7．生物素化过氧化物酶 5m1。用户自备试剂：原位杂交专用盖玻片；Poly-L-Lysine ; DEPC；20％甘油；缓冲液(...
wb带型数据后有+或-啥意思
：答：如果目标条带没有信号，可能是样品中可能含有蛋白酶，使蛋白样品分解成小分子，可以添加蛋白酶抑制剂来解决。如果目标条图片背景过高，难以分辨条带可能是因为一抗浓度太高，导致抗体非特异性结合，需要降低一抗浓度。如果膜上出现黑点和黑斑，可能是膜上其他部位与一抗或二抗非特异性结合，配置的封闭液...
wb封闭液可以重复使用吗
：答：可以。在wb封闭液使用方法中了解到该产品是可以重复使用的，是可以进行3次重复使用的，该产品是最新一代的即用型、高效快速Western封闭液。
快速封闭液封闭后用不用清洗
：答：不用。封闭的目的就是要靠蛋白填补未被包被物占领的空间，清洗后不会对蛋白起到保护作用。快速封闭液是新一代的即用型、高效快速封闭液，即用型封闭液，无需配制，使用便捷，封闭时间短，快速高效。
ELISA实验本底偏高,封闭液是2%BSA,于是将2%的BSA与TMB混合呈蓝色,将...
：答：BSA是牛血清制品，有可能会残留一些过氧化物酶的活性，但是我们长期以来使用的各种BSA从来没有出过问题的。如果您PBST没有问题，是不是也要考虑2%BSA溶液被污染了，重新配一些试试，用干净的容器和试验过的PBST。
wb二抗孵育完不显影
：答：封闭不充分，重新孵育。wb二抗孵育完不显影是因为封闭不充分，导致二抗孵育完不能立即显色，需要在wb检测前选择更加合适的封闭液，并适当延长优化封闭条件时间与温度。
汪齿炉: ： 组织裂解液(全细胞蛋提取): 1:Tris-HCL 50mmoL/L PH 7.4 2: Nacl 150 mmoL/L 3: 去氧胆酸钠 0.25% 4:NP-40或Triton-x-100 1% 5: EDTA 1 mmoL/L 6: PMSF 1 mmoL/L 7: Aprotinin 1μg/ml 8: leupeptin 1μg/ml 9: pepstain 1μg/ml 其中:7,8,9作...
衡委岩15765345108： 求助WB一抗稀释浓度 -
汪齿炉: ： 建议起始浓度1:200开始(当然你也可以1:100,如果你的背景不高的话),倍比稀释,不是再做1:100-1:1000稀释,注意了.其实没有必要分装,一般都会添加保护剂的.如果你一定要分装,建议原液分装或是10稀释后分装. 原液分装.抗体孵育之前稀释. 做WB的浓度不一定需要很高的.可以设置简单梯度1:200;1:500;1:1000 .看结果再优化
衡委岩15765345108： 10ug的tgf - beta1抗体怎样稀释用于wb试验 -
汪齿炉: ： 这个取决于是该厂家的那种抗体,以及抗体稀释后是做什么用的.比如该厂家的WB抗体,如果是1mg/ml的抗体,一般做WB的时候要求抗体工作液的浓度是1ug/ml,也就是说1mg/ml的抗体是可以按照1:1000的比例进行稀释.当然,根据抗体亲和力不同,这个浓度也是可以变化的.所以abcam的WB抗体稀释浓度一般是1ug/ml
衡委岩15765345108： 什么是封闭缓冲液 -
汪齿炉: ： 您好!封闭缓冲液是指在蛋白杂交或者酶连免疫试验中,为避免非特性吸附,将杂交膜或者 平板未结合待测蛋白的位点用脱脂奶粉之类的蛋白进行结合封闭. 百度教育团队【海纳百川团】为您解答. 感谢您的采纳,O(∩_∩)O 如有疑问,欢迎追问.
衡委岩15765345108： wb封闭用的牛奶还能再稀释抗体吗 -
汪齿炉: ： 封闭及稀释抗体最好用脱脂奶. wb封闭用的还能再稀释抗体,但是效果会变差.不值得浪费你的时间还抗体等试剂,脱脂奶很便宜(比较抗体而言). 建议另用新鲜配置的. 建议在配制封闭液(脱脂奶加缓冲液等)时 多配点,到足够封闭和稀释抗体用的,分开使用为好.
衡委岩15765345108： WB上样缓冲液加加多少是怎么确定的 -
汪齿炉: ： 上样缓冲液也有多种,一般是80ul的样本加20ul的上样缓冲液,这样基本上上样50ug的体积在10ul左右. 最好是测浓度,一般不超过30-40ug,上样缓冲液一般4*或者5*,这个没太大区别.
衡委岩15765345108： 谁做过wb检测磷酸化蛋白的,加不加磷酸酶抑制剂.加到封闭液里还是裂解液里? -
汪齿炉: ： 一般加到裂解液中,可以购买商业化的产品.推荐一个配方,矾酸钠和氟化钠.
衡委岩15765345108： dot blot,怎么加抗体 -
汪齿炉: ： dot blot点完膜以后,就可以按照正常的WB流程,封闭,然后封闭液稀释一抗去孵膜了,没有特别大的差别.如果担心信号太强,可以稍微多稀释一点抗体.
衡委岩15765345108： 急求 TMB做western blot 底物缓冲系统是什么 底物如何配置 拜托哪位高人指点一下 拜托拜托
汪齿炉: ： 这是我用的配方: buffer:0.1M 柠檬酸+0.2M Na2HPO4 pH5.0-5.4 TMB:2mg/ml溶于无水乙醇或者DMSO H2O2: 30% 工作液:0.5ml TMB+ 9.5ml buffer+ 1ul H2O2 但是要注意,其实WB并不是太适宜用TMB显色,除非你买专用的沉淀型TMB显色kit.因为通常TMB可溶于水,你晃一晃条带就晃没了.最好用DAB或者ECL.
衡委岩15765345108： 做WB的时候,bcl - xl要稀释多少倍,cleaved caspase3呢? -
汪齿炉: ： 看说明书 一般1:1000稀释 杂不出来的话可加大浓度
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